肺癌中CYP2J2基因啟動(dòng)子區(qū)異常高甲基化.pdf

1、肺癌是世界上最常見的癌癥死亡原因之一。盡管近年來(lái)在診斷技術(shù)和治療方法上均有很大的提高，但是肺癌的預(yù)后仍然不佳，原因是三分之二以上的病人在確診時(shí)已經(jīng)發(fā)生了微小轉(zhuǎn)移。因此，探索有效的早期診斷肺癌的方法，爭(zhēng)取在外科手術(shù)治愈前盡早診斷是當(dāng)務(wù)之急。一種行之有效的方法是，找到肺癌特異性分子標(biāo)記物，尤其是在最早期階段就能檢測(cè)到的與肺癌發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)的特異性標(biāo)記物。迄今為止，傳統(tǒng)的放射線及痰液細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)長(zhǎng)期吸煙者進(jìn)行早期篩查并沒(méi)有降低肺癌死亡率。

2、r>　　 表觀遺傳學(xué)是推動(dòng)腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素之一，而甲基化是最常見的表觀遺傳改變。近年來(lái)的研究表明，基因甲基化是許多類型腫瘤，包括肺癌，發(fā)生發(fā)展中的早期事件。肺癌中多種基因頻繁地發(fā)生甲基化，包括腫瘤抑制基因P16、DNA修復(fù)基因MGMT、粘附分子E-cadherin及RARβ等與腫瘤相關(guān)的基因。與遺傳學(xué)改變不同的是，表觀遺傳學(xué)改變是一種可逆的過(guò)程，特異性DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-dc能使基因去甲基化而激活沉默的基因。

3、r>　　 CYP2J2基因在腫癌（包括肺癌）的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。目前，很多研究集中在CYP2J2對(duì)病理生理作用上，如CYP2J2在腫瘤、心血管疾病及藥物和異物代謝方面的作用，而表達(dá)調(diào)控面的研究尚未見報(bào)道。闡明表達(dá)調(diào)控的機(jī)制，有利于腫瘤CYP2J2基因的早期診斷及靶向治療，因此，對(duì)其表達(dá)調(diào)控的機(jī)制進(jìn)行深入研究非常有必要。遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)在調(diào)節(jié)基因表達(dá)方面均起著至關(guān)重要的作用，本研究從表觀遺傳學(xué)角度，研究DNA甲基化在CYP

4、2J2基因表達(dá)調(diào)控中的作用同時(shí)，對(duì)CYP2J2基因甲基化在肺癌中的臨床意義進(jìn)行了探討。發(fā)現(xiàn)CYP2J2基因在肺癌中處于高甲基化，證實(shí)了CYP2J2甲基化能部分調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞中CYP2J2基因的表達(dá)，明確了CYP2J2基因甲基化水平與性別有關(guān)，更有趣的是CYP2J2基因甲基化與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后有關(guān)。
　　 首先，用MSP方法檢測(cè)了三種肺癌細(xì)胞（A549、NCI-H446和NCI-H460）中CYP2J2基因甲基化狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)三種肺

5、癌細(xì)胞中CYP2J2基因啟動(dòng)子區(qū)均發(fā)生了甲基化。接著，用去甲基化藥物5-Aza-dC干預(yù)上述三種肺癌細(xì)胞系，用real-time PCR及MSP方法檢測(cè)干預(yù)前后CYP2J2 mRNA表達(dá)和啟動(dòng)子區(qū)甲基化變化。結(jié)果顯示：A549和NCI-H460細(xì)胞CYP2J2 mRNA表達(dá)量較處理前增多，而NCI-H446細(xì)胞的表達(dá)量無(wú)明顯改變；而A549和NCI-H460細(xì)胞甲基化M帶密度較處理前變淺，U帶密度較處理前增強(qiáng)，NCI-H446細(xì)胞甲基化

6、在處理前后無(wú)明顯的改變。這些結(jié)果表明，CYP2J2基因甲基化部分調(diào)節(jié)其表達(dá)。
　　 為了進(jìn)一步研究在體腫瘤CYP2J2基因甲基化情況，用MSP方法檢測(cè)了56對(duì)肺癌組織和癌旁正常組織，及10例非腫瘤患者正常肺組織中CYP2J2基因甲基化。結(jié)果顯示，56例肺癌中，44例（78.6％）完全甲基化; 7例（12.5％）部分甲基化，5例（8.9％）未甲基化； 56例配對(duì)癌旁正常肺組織中28例（50％）完全甲基化，10例（17.9％）部分甲

7、基化，18例（32.1％）未甲基化；而在10例非腫瘤患者肺組織中無(wú)一例甲基化。癌旁正常組織中檢測(cè)到甲基化，提示1、甲基化發(fā)生在腫瘤發(fā)生的早期階段；2、甲基化的發(fā)生早于病理形態(tài)的改變；3、甲基化可能是腫瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中的一部分。在癌組織以及癌旁正常組織中發(fā)現(xiàn)CYP2J2基因甲基化，但是對(duì)照組中無(wú)1例發(fā)生甲基化，提示CYP2J2基因甲基化可能是腫瘤的特異性改變。因此，CYP2J2基因甲基化可能作為腫瘤早期診斷的標(biāo)志。
　　 CY

8、P2J2甲基化是否是臨床病理因子之間存在相關(guān)性分析表明CYP2J2甲基化與肺癌病人年齡、腫瘤病理類型、分期、吸煙及生存率之間的沒(méi)有明顯的相關(guān)性，但是男性患者的CYP2J2甲基化頻率較女性患者高；另外，CYP2J2基因甲基化與全體肺癌患者（包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌）整體生存率之間沒(méi)有明顯的關(guān)系，但是對(duì)于非小細(xì)胞肺癌患者而言，CYP2J2基因高甲基化的兩年生存率明顯高于CYP2J2基因低甲基化或者未發(fā)生甲基化的患者。
　　 本研

9、究表明CYP2J2是一種新發(fā)現(xiàn)的，在肺癌中高度甲基化的基因。CYP2J2在三種肺癌細(xì)胞、56例肺癌組織及相應(yīng)的癌旁正常組織中均有明顯的甲基化，但是在非腫瘤患者的肺組織中幾乎沒(méi)有甲基化；用去甲基化藥物5-Aza-dC處理肺癌細(xì)胞可以通過(guò)部分逆轉(zhuǎn)CYP2J2基因的甲基化狀態(tài)從而調(diào)節(jié)CYP2J2基因的表達(dá)；通過(guò)對(duì)CYP2J2甲基化與臨床病理因素之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)女性患者的甲基化頻率低于男性患者，而且CYP2J2基因甲基化是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)