單劑量照射制備大鼠放射性肝纖維化模型的建立及評價.pdf

1、目的:
　　單次劑量照射制備大鼠放射性肝纖維化實驗動物模型,觀察造模后各個時期大鼠肝功能、肝臟標本病理學形態(tài)、血清學細胞因子以及肝臟免疫組化指標等改變。并初步探討大鼠造模后相關細胞因子及TGF-β1/Smads信號傳導通路在放射性肝纖維化中的作用,揭示放射性肝纖維化的發(fā)病機制,為臨床預防和治療放射性肝纖維化提供理論基礎及實驗依據(jù)。
　　方法:
　　將60只實驗大鼠隨機分為正常對照組(A組)10只、照射組(B組)50只。

2、除正常對照組外,B組大鼠用10％水合氯醛0.3ml/100g全麻后,美國VARIN21-EX直線加速器照射大鼠右半肝,源皮距為100cm,劑量率600cGy/min,30Gy/單次,照射野2.5 cm×2.5 cm,每只動物右側胸腔及胃腸均用鉛塊遮擋,照射后等待大鼠自然蘇醒,A組大鼠只麻醉不進行照射。
　　于照射后第2、4、8、12、26周末分批分別剖殺。10%水合氯醛腹腔麻醉(0.3ml/100g體重)后,稱重并記錄,自腹主動脈

3、取血,室溫靜置30min,在3000r/min的條件下離心10min,收集上清液置入凍存管中,在-80℃條件下凍存?zhèn)溆?然后檢測大鼠血清中AST、ALT的活性,ELISA法測血清中TGF-β1、TNF-α、IL-6、HA、PC-Ⅲ、LN含量,堿水解法檢測大鼠肝臟組織中Hyp含量;然后立即處死大鼠,迅速切開腹腔。A組10只大鼠于第4周末處死做對照。取右肝置于10%中性甲醛溶液中固定,常規(guī)石蠟包埋,行HE染色和Masson染色及免疫組化檢測

4、肝臟組織TGF-β1、Smad3/4/7、PDGF-BB、TIMP-1、MMP13蛋白表達情況。
　　結果:
　　與對照組(A組)比較,B組受照射肝組織表現(xiàn)出放射性肝炎及肝纖維化,照射組大鼠血清中AST,ALT酶活性和TGF-β1水平自第4周升明顯升高(P<0.05或P<0.01),于第12周末達到高峰;照射組大鼠血清中HA、PC-Ⅲ、LN含量和肝臟組織中Hyp含量于照射后第4周顯著升高(P<0.05或P<0.01),一直呈

5、上升趨勢,照射后26周值最高;病理結果顯示,大鼠肝臟病變呈慢性進行性肝纖維化改變。免疫組化結果顯示,照射組大鼠肝臟組織中 TGF-β1、Smad3/4蛋白表達于照射后第2周開始升高(P<0.05),照射后第12周達到高峰,26周開始下降;Smad7蛋白表達于照射后第2周明顯減少(P<0.05),照射后第12周達最低水平。另外,照射組大鼠肝臟組織中PDGF-BB和TIMP-1蛋白表達于照射2周升高,照射后26周最高,MMP-13蛋白表達在