乙型肝炎、丙型肝炎血清學(xué)模式調(diào)查及病毒核酸混合標(biāo)本檢測方法研究.pdf

1、目的：我國是病毒性肝炎大國，一般人群已成為乙型肝炎、丙型肝炎防治工作的重點(diǎn)，國產(chǎn)酶標(biāo)試劑血清學(xué)檢測結(jié)果并不能反映人群全部感染情況，一些乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性的乙型肝炎病毒(HBV)感染以及急性HBV、丙型肝炎病毒(HCV)窗口期感染可以通過核酸檢測技術(shù)(NAT)加以確認(rèn)，對一般人群進(jìn)行血液HBV、HCV病毒標(biāo)志物血清學(xué)及分子生物學(xué)檢測，既可為完善病毒性肝炎防治措施提供有價(jià)值的人群陽性率信息，又可為當(dāng)?shù)孬I(xiàn)血人群的篩查改進(jìn)研究提

2、供流行病學(xué)參考依據(jù)，提高輸血安全。我們研究包括三個方面：(1)采用血清學(xué)方法，對江蘇省部分地區(qū)一般人群乙肝、丙肝病毒標(biāo)志物進(jìn)行檢測，了解HBsAg陰性人群乙肝血清標(biāo)志物構(gòu)成模式，分析病毒核酸檢測的必要性。(2)采用核酸檢測技術(shù)，檢測混合血清乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)、丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)。(3)研究混合檢驗(yàn)法總體率可信區(qū)間估計(jì)方法，并估計(jì)江蘇省部分地區(qū)一般人群HBV DNA、HCV RNA陽性率可信區(qū)間。

3、研究萬法：(1)按照分層整群隨機(jī)抽樣方法，對在金壇市、海門市、海安縣、贛榆縣抽取的一般人群進(jìn)行HBsAg、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎核心抗體(HBcAb)、丙型肝炎抗體(HCVAb)檢測。分析不同地區(qū)、不同年齡HBsAg陰性一般人群乙肝血清標(biāo)志物不同模式構(gòu)成。(2)依據(jù)一般人群血清學(xué)模式構(gòu)成情況，對HBsAg陰性不同血清學(xué)模式的標(biāo)本按12人份進(jìn)行混合，提取乙肝、丙肝病毒核酸，并采用熒光定量聚合酶鏈檢測技術(shù)(RT-PCR)進(jìn)

4、行檢測。應(yīng)用混合血清總體率可信區(qū)間估計(jì)方法計(jì)算一般人群HBVDNA、HCV RNA檢出率。(3)選取HBV DNA、HCV RNA陽性混合組進(jìn)行拆分檢測，采用熒光定量PCR檢測單份血清病毒核酸。(4)對HCVAb酶聯(lián)免疫檢測法(ELISA)初檢陽性，HBsAg ELISA法復(fù)檢陽性血清標(biāo)本提取病毒核酸，用熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測。(5)在分析國外Sacks氏方法及Kline氏方法基礎(chǔ)上，運(yùn)用校正一次近似法計(jì)算混合檢驗(yàn)法總體率可信區(qū)間，

5、并與精確概率法計(jì)算結(jié)果進(jìn)行比較。 研究結(jié)果：(1)江蘇省一般人群HCVAb總陽性率為0.76％，蘇南地區(qū)的HCVAb陽性率明顯高于蘇中、蘇北地區(qū)。江蘇省一般人群的HBsAg總陽性率為4.84％，蘇中和蘇南地區(qū)的HBsAg陽性率高于蘇北地區(qū)。在HBsAg陰性人群中，蘇中地區(qū)以單項(xiàng)HBcAb(+)，以及HBsAb(+)伴HBcAb(+)的構(gòu)成居多，明顯高于蘇南、蘇北地區(qū)。(2)對蘇南、蘇中地區(qū)HBsAg陰性人群檢測HBV DNA的結(jié)

6、果表明，兩個地區(qū)HBsAg陰性人群HBV DNA總檢出率為1.53％(95％CI[0.98％，2.34％])，其中蘇中地區(qū)HBV DNA檢出率為1.95％(95％CI[1.11％，3.15％])，蘇南地區(qū)HBV DNA檢出率為0.91％(950/6CI[0.29％，2.11％])。在蘇中地區(qū)HBsAg陰性人群中，HBV DNA陽性結(jié)果主要集中在單項(xiàng)HBcAb(+)，以及HBsAb(+)伴HBcAb(+)者中。另外，蘇南地區(qū)30份HBsA

7、g復(fù)檢陽性的血清中有11份HBV DNA檢測陽性。(3)江蘇省HBsAg陰性人群HCV RNA陽性率為0.51％，95％CI是[0.23％，0.98％]；其中，蘇南地區(qū)HCV RNA陽性率最高，為1.47％(95％CI[0.6％，2.9％])，蘇北地區(qū)較低，為0.3％(95％CI[0.0075％，1.7％])，蘇中地區(qū)沒有檢出HCV RNA陽性標(biāo)本。另外，所有HCVAb初檢陽性、復(fù)檢陰性的血清HCV RNA均檢測陰性，27份HCVAb復(fù)

8、檢陽性的血清有11份HCV RNA檢測陽性。(4)我們提出的總體率可信區(qū)間估計(jì)方法與國外的Sacks氏方法及Kline氏方法進(jìn)行比較，在陽性率不太低時(shí)，幾種方法差別不大，而當(dāng)陽性率較低時(shí)，校正一次近似法計(jì)算結(jié)果與精確概率法相近，可以得出較理想的非負(fù)下限值。 結(jié)論： (1) 江蘇省蘇中和蘇南地區(qū)一般人群HBsAg陽性率高于蘇北地區(qū)。蘇中地區(qū)HBsAg陰性一般人群中，單項(xiàng)抗HBc(+)，以及抗HBc(+)伴抗HBs(+)的構(gòu)

9、成比高于蘇南、蘇北地區(qū)。 (2)HBsAg陰性人群中HBV DNA檢出率蘇中高于蘇南地區(qū)。在HBsAg陰性人群中，單項(xiàng)抗HBc(+)，以及抗HBc(+)伴抗HBs(+)人群的HBV DNA陽性率應(yīng)引起重視。建議在獻(xiàn)血員血液篩查時(shí)考慮進(jìn)行混合血清HBV DNA檢測以減少HBV感染發(fā)生。 (3) 江蘇省蘇南地區(qū)一般人群HCVAb陽性率及HCV RNA檢出率均高于蘇中、蘇北地區(qū)。 (4) 混合血清HBV DNA、HCV