moesin在胰腺癌嗜神經(jīng)性中的分子機(jī)制及與疼痛的相關(guān)性.pdf

1、近年來，胰腺癌發(fā)病率在全國(guó)乃至全世界均呈明顯的上升趨勢(shì)。大約40%的胰腺癌患者在診斷時(shí)就已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，而神經(jīng)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是其最常見的轉(zhuǎn)移途徑和重要特點(diǎn)之一，也是導(dǎo)致胰腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)率高和預(yù)后差的重要原因之一。目前認(rèn)為神經(jīng)浸潤(rùn)是引起胰腺癌復(fù)發(fā)和癌性疼痛的重要原因，是其獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。近年來，胰腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移，尤其是胰腺癌的神經(jīng)定向轉(zhuǎn)移問題，日益成為臨床與基礎(chǔ)研究中的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。 自從1889年P(guān)eget首次提出癌轉(zhuǎn)移的“種子與土壤”

2、學(xué)說、1929年Ewing提出腫瘤轉(zhuǎn)移的“機(jī)械與解剖”學(xué)說，多強(qiáng)調(diào)癌細(xì)胞自身的侵襲能力、運(yùn)動(dòng)能力等生物學(xué)特性的改變以及對(duì)組織、器官的被動(dòng)適應(yīng)。多年來，從亞細(xì)胞、細(xì)胞及其微環(huán)境、細(xì)胞與宿主機(jī)體的相互關(guān)系等諸多方面進(jìn)行了深入廣泛的研究，初步形成現(xiàn)代腫瘤轉(zhuǎn)移理論：基因參與下的轉(zhuǎn)移調(diào)控機(jī)制。該機(jī)制認(rèn)為，腫瘤是由諸多因素決定的多步驟、序貫性的生物學(xué)過程。除強(qiáng)調(diào)腫瘤細(xì)胞自身因素外，更強(qiáng)調(diào)促轉(zhuǎn)移因素與抑轉(zhuǎn)移因素間網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的平衡性、宿主微環(huán)境的可塑性、

3、宿主整體/局部免疫和腫瘤細(xì)胞的主動(dòng)適應(yīng)性變化等。 但胰腺癌神經(jīng)組織浸潤(rùn)的確切分子機(jī)制至今尚不明朗。以往研究認(rèn)為，主要是神經(jīng)周圍間隙中張力較低，易于腫瘤生長(zhǎng)，胰腺癌神經(jīng)浸潤(rùn)是在平面最小阻力處即神經(jīng)束膜的薄弱部位侵入神經(jīng)，并在神經(jīng)周圍間隙內(nèi)連續(xù)浸潤(rùn)，到達(dá)遠(yuǎn)處形成新的轉(zhuǎn)移灶。近年來的研究表明，某些表面特性分子和神經(jīng)組織周圍微環(huán)境成分在腫瘤的嗜神經(jīng)性上可能起著重要作用。膜結(jié)構(gòu)伸展刺突蛋白moesin，是ERM蛋白家族的成員之一，表達(dá)于許

4、多細(xì)胞膜突出部位，如偽足、微絨毛等，對(duì)維持細(xì)胞骨架及運(yùn)動(dòng)都起著重要作用，參與人體生理狀態(tài)下的許多基本生命活動(dòng)，是近年來被廣泛關(guān)注的一類特殊蛋白質(zhì)。近年發(fā)現(xiàn)其廣泛表達(dá)于多種腫瘤組織中，在腫瘤發(fā)生、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移過程中可能扮演著重要角色，這一觀點(diǎn)近年來已在口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌、宮頸癌、頭頸惡性腫瘤以及某些消化系統(tǒng)的惡性腫瘤組織中得到了證實(shí)。但moesin是否在胰腺癌轉(zhuǎn)移途徑中發(fā)揮了作用，其作用機(jī)制仍不太清楚。為此，本課題選擇moesin——這一新

5、近受到關(guān)注的指標(biāo)作為研究切入點(diǎn)，探討胰腺癌發(fā)生神經(jīng)侵襲轉(zhuǎn)移的原因和機(jī)制。 目的： 收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科手術(shù)切除的胰腺癌組織標(biāo)本，從免疫組織化學(xué)、RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、ELISA等方法檢測(cè)moesin、β-NGF和MMP-7在人胰腺癌組織中的表達(dá)分布，初步探討moesin、β-NGF和MMP-7在人胰腺癌組織中的作用及其與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。并在以上研究的基礎(chǔ)上結(jié)合患者臨床癥狀，探討moes

6、in、β-NGF和MMP-7與胰腺癌患者疼痛癥狀的關(guān)系，以及胰腺癌疼痛與其臨床病理學(xué)改變的相關(guān)性，進(jìn)一步明確其神經(jīng)性疼痛產(chǎn)生的原因，并探索緩解胰腺癌患者疼痛的方法，提高其生存質(zhì)量。 方法： （1）采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)胰腺癌組織中moesin、β-NGF和MMP-7各指標(biāo)的表達(dá)、分布特點(diǎn)，并且分析其與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。 （2）應(yīng)用PT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、ELISA等分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)該組標(biāo)本

7、中moesin、β-NGF和MMP-7的蛋白表達(dá)，在驗(yàn)證免疫組化結(jié)果的同時(shí)，分析moesin對(duì)癌細(xì)胞中β-NGF和MMP-7表達(dá)的影響，以探索moesin對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的分子機(jī)制和此過程中moesin可能存在的調(diào)控機(jī)制。 （3）在上述二部分的基礎(chǔ)上，初步探討moesin、β-NGF和MMP-7與胰腺癌患者疼痛癥狀的關(guān)系，以及胰腺癌疼痛與其臨床病理學(xué)改變的相關(guān)性，進(jìn)一步明確其神經(jīng)性疼痛產(chǎn)生的原因，并探索緩解胰腺癌患者疼痛

8、的方法。 （4）采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以p<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： （1）moesin、β-NGF、MMP-7均參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展。44例胰腺癌組織中有24例存在神經(jīng)浸潤(rùn)（幾率為54.55%）。侵入型8例，圍神經(jīng)型16例。Moesin的表達(dá)在胰腺癌組織中明顯高于正常組織，在胰體尾部癌組織中高于胰頭癌，在有神經(jīng)侵犯組明顯高于無神經(jīng)侵犯組，而且靠近神經(jīng)組織的癌細(xì)胞moesin陽(yáng)性程

9、度高于遠(yuǎn)離神經(jīng)組織的癌細(xì)胞。此外，隨著癌細(xì)胞分化程度的降低和臨床TNM分期的增加，moesin表達(dá)水平增加，moesin表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯增加。Β-NGF、MMP-7的表達(dá)與胰腺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系和moesin相似，經(jīng)過相關(guān)性分析顯示β-NGF、MMP-7和moesin的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)。 （2）運(yùn)用RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、ELISA等分子生物學(xué)檢測(cè)方法從RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)、基因表達(dá)等三個(gè)方面

10、來驗(yàn)證胰腺癌細(xì)胞中moesin的表達(dá)情況。Moesin在胰腺癌組織中高表達(dá)，且與β-NGF和MMP-7之間呈現(xiàn)正相關(guān)的表達(dá)，該結(jié)論與第一部分免疫組織化學(xué)方法得到的結(jié)論一致，從而進(jìn)一步驗(yàn)證了moesin作為一個(gè)新近受到關(guān)注的指標(biāo)與胰腺癌病情進(jìn)展相關(guān)，并參與了胰腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移機(jī)制。 （3）胰腺癌伴有疼痛者比不伴有疼痛者的moesin、β-NGF和MMP-7水平高，而且第一和第二部分結(jié)果證明moesin、β-NGF和MMP-7水平與胰

11、腺癌嗜神經(jīng)性有關(guān)，說明胰腺癌患者的疼痛發(fā)生和胰腺癌的嗜神經(jīng)性、胰腺癌細(xì)胞的moesln、β-NGF和MMP-7表達(dá)水平有關(guān)。胰腺癌腫瘤位置、大小、TNM分期以及其對(duì)胰內(nèi)神經(jīng)、胰腺前方被膜和腹膜后組織的浸潤(rùn)與疼痛有顯著相關(guān)性，而分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及其對(duì)胰外神經(jīng)、遠(yuǎn)端膽管和十二指腸壁的浸潤(rùn)與疼痛沒有顯著相關(guān)性。 結(jié)論： （1）moesin、β-NGF、MMP-7均參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展，與胰腺癌嗜神經(jīng)性成正相關(guān)，并且與臨床