膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子在胰腺癌神經(jīng)浸潤中作用的實驗研究.pdf

1、研究背景： 近年來胰腺癌發(fā)病率在國內(nèi)外均呈穩(wěn)固上升趨勢。胰腺癌是預(yù)后最差的消化系統(tǒng)腫瘤。大約40％的胰腺癌患者在診斷時就已發(fā)生轉(zhuǎn)移，而神經(jīng)浸潤是其最常見的轉(zhuǎn)移途徑。目前認(rèn)為神經(jīng)浸潤是引起胰腺癌復(fù)發(fā)和癌性疼痛的重要原因，可作為其獨立預(yù)后指標(biāo)。但胰腺癌神經(jīng)浸潤轉(zhuǎn)移的確切分子機(jī)制至今尚不明朗。以往研究認(rèn)為，胰腺癌神經(jīng)浸潤是在平面最小阻力處(神經(jīng)束膜的薄弱部位)侵入神經(jīng)，并在神經(jīng)周圍間隙內(nèi)連續(xù)浸潤，到達(dá)遠(yuǎn)處形成新的轉(zhuǎn)移灶。近年來分子生物

2、學(xué)研究表明，某些特異性因子和神經(jīng)組織周圍微環(huán)境在腫瘤的嗜神經(jīng)性生長上可能發(fā)揮著重要作用。 目的： 探討膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)與胰腺癌神經(jīng)浸潤等生物學(xué)行為的關(guān)系和對胰腺癌細(xì)胞侵襲力的影響，尋找與胰腺癌神經(jīng)浸潤相關(guān)的特異因子，深入認(rèn)識胰腺癌神經(jīng)浸潤的分子機(jī)制，為尋找相關(guān)的基因變化和作用靶點提供參考。 方法： (1)對46例胰腺癌組織石蠟標(biāo)本連續(xù)切片6-8張，分別用于HE染色和免疫組織化學(xué)染色。光

3、鏡下觀察HE切片，觀察癌組織神經(jīng)浸潤情況，首先區(qū)分神經(jīng)浸潤與非神經(jīng)浸潤。 (2)采用免疫組化EnVision二步法(PV-9000)檢測46例胰腺癌組織及12例正常胰腺組織中GDNF和NCAM的表達(dá)情況； (2)胰腺癌細(xì)胞AsPC-1培養(yǎng)于含有GDNF10ng/ml，100ng/ml培養(yǎng)基，及含有GDNF受體(RET)抑制劑的大豆異黃酮(Genistein)培養(yǎng)基。RT—PCR檢測各培養(yǎng)組細(xì)胞MMP-9mRNA表達(dá)情況。

4、 結(jié)果： (1)46例胰腺癌組織標(biāo)本中共檢測出有21例發(fā)生神經(jīng)浸潤，神經(jīng)浸潤發(fā)生率為45.7％： (2)胰腺癌組織中GDNF的表達(dá)率63％高于正常胰腺組織25％，差異有顯著意義(x2=5.57，P＜0.05)；NCAM在胰腺癌組織和正常胰腺組織中的表達(dá)率分別為32.6％(15/46)和66.7％(8/12)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=3.03，P＞0.05)。GDNF在胰腺癌神經(jīng)浸潤組的陽性率明顯高于非神經(jīng)浸潤組(

5、x2=12.48，P＜0.01)；NCAM在神經(jīng)浸潤組的陽性率低于非神經(jīng)浸潤組(x2=5.90，P＜0.05)；二者與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P＞0.05)；二者在胰腺癌中的表達(dá)無相關(guān)性(P＞0.05)； (3)經(jīng)GDNF作用后，胰腺癌細(xì)胞MMP-9表達(dá)明顯增多，而其受體抑制劑Genistein可抑制該做用。 結(jié)論： (1)GDNF與胰腺癌神經(jīng)浸潤密切相關(guān)，NCAM以表達(dá)缺失促進(jìn)了胰腺癌神經(jīng)浸潤。其檢