2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)是1993年Lin等發(fā)現(xiàn)的一種新的有活性的神經(jīng)營養(yǎng)因子,近年來,讓生殖屆學(xué)者感興趣的是,GDNF不僅可以在外周器官中表達(dá),也可以在卵巢中的表達(dá),且其表達(dá)水平尤為突出。在睪丸組織中的表達(dá)亦是十分的顯著。卵巢中的神經(jīng)不僅和血管相連,也和卵泡相連接,同時可以發(fā)現(xiàn)異位移植的卵巢組織迅速的長出神經(jīng)纖維。GDNF在卵巢組織中

2、高表達(dá),且分布泌尿系統(tǒng)和成年個體的卵巢中且貫穿整個胚胎發(fā)育階段,主要集中在卵泡的顆粒細(xì)胞上。小鼠GDNF的mRNA表達(dá)水平隨著卵泡的發(fā)育逐漸的變顯著,直到排卵前達(dá)到最高峰?;谏鲜銮闆r,小鼠GDNF基因蛋白主要分布于卵子和顆粒細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞上。Kawamura等人進(jìn)行了一項DNA微陣列分析的實驗,也證實了在小鼠中DGNF的重要作用,后續(xù)的實驗表明GDNF的小鼠卵巢中廣泛表達(dá),在卵丘細(xì)胞,顆粒細(xì)胞和細(xì)胞膜細(xì)胞中均有表達(dá)。無論是新生小鼠還

3、是成年小鼠的卵巢中均有GDNF的mRNA的表達(dá),貫穿整個的發(fā)育階段,主要集中在卵泡中的卵子的間質(zhì)細(xì)胞中,在竇卵泡的卵丘細(xì)胞,顆粒細(xì)胞和細(xì)胞膜細(xì)胞中也均有表達(dá)。從經(jīng)歷卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)(IVM)的婦女的卵母細(xì)胞的實驗觀察發(fā)現(xiàn),在卵泡成熟的最后階段內(nèi)GDNF蛋白在卵巢內(nèi)的表達(dá)范圍是擴大的,主要分布在未受刺激的的顆粒細(xì)胞中。逐步的,通過人和各種哺乳動物中所獲得數(shù)據(jù)配對,我們可以總結(jié)出GDNF及其受體的表達(dá)模式,在成年女性/雌性卵巢內(nèi)GDNF

4、以旁分泌和自分泌的方式影響卵母細(xì)胞和卵丘細(xì)胞。雖然對于GDNF在生殖方面的研究已經(jīng)較多,但是人卵巢方面的研究卻仍然很少,有證據(jù)表明人黃素化顆粒細(xì)胞核及細(xì)胞漿內(nèi)存在GDNF, GFRa-1, Ret的表達(dá),且FHS和hCG可以增加顆粒細(xì)胞中的GDNF的表達(dá),并且以旁分泌的方式促進(jìn)卵泡成熟。在卵巢組織體外培養(yǎng)的過程中,加入GDNF可以促進(jìn)卵泡的發(fā)育和成熟,然而對于GDNF直接作用于卵泡以及卵泡顆粒細(xì)胞的研究卻仍然較少。
  本研究以K

5、GN卵泡顆粒細(xì)胞和人竇前卵泡為研究對象,觀察GDNF刺激對人竇前卵泡體外培養(yǎng)所起作用,并得出其所起作用的最佳濃度,以該最佳濃度作用卵泡顆粒細(xì)胞的體外培養(yǎng),觀察其卵泡顆粒細(xì)胞的增殖變化的作用,對卵泡顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)激素水平的影響,以及對卵泡顆粒細(xì)胞中FSHR基因表達(dá)的影響,初步探討GDNF作用于卵泡的可能作用機制。
  目的:
  觀察GDNF對凍融后人竇前卵泡體外發(fā)育的作用;探討GDNF在KGN細(xì)胞增殖過程中影響,以及GDN

6、F刺激后KGN細(xì)胞基因表達(dá)的變化,為臨床應(yīng)用提供有利的理論和實驗依據(jù)。
  方法:
  1.搜集卵巢囊腫手術(shù)患者的正常卵巢皮質(zhì),采用玻璃化冷凍的方法行冷凍處理,解凍后行酶消化法消化,消化后機械法于鏡下取始基卵泡和初級卵泡,置于FA凝膠內(nèi),GDNF刺激,選擇適當(dāng)濃度,觀察GDNF刺激后體外培養(yǎng)卵泡變化。
  2.體外培養(yǎng) KGN細(xì)胞,傳代入12孔皿后,行爬片處理,采用免疫組化和RT-PCR法檢測其受體GDNF家族受體酪氨

7、酸激酶受體RET(rearranged during transfeetion)的表達(dá)。
  3.體外培養(yǎng)KGN細(xì)胞,傳代入96孔皿后,分別給予不同濃度GDNF刺激,觀察24h、48h后做CCK-8刺激后細(xì)胞增殖情況。
  4.體外培養(yǎng)KGN細(xì)胞,于6孔皿傳代后,試驗組給予10ng/mlGDNF刺激,24h,48h后分別收集試驗組和控制組液體1ml,檢測2組間雌激素、孕激素變化。
  5.體外培養(yǎng)KGN細(xì)胞,于6孔皿傳

8、代后24h,行饑餓處理6h后,給予1ul含GDNF試劑至試驗組使GDNF濃度為10ng/ml,6h后裂解細(xì)胞并提取RNA,做PCR,檢測基因變化。
  結(jié)果:
  1.經(jīng)膠原酶消化而后采用機械法分離凍融后人卵巢組織片中的竇前卵泡,并將分離后的卵泡置于凝膠中,給予GDNF刺激,10ng/mlGDNF組E2值升高,且顯著高于對照組和1ng/mlGDNF組(P<0.05)。
  2.GDNF的受體蛋白RET在顆粒細(xì)胞上有表達(dá)

9、,定位于胞核和胞漿。
  3.不同濃度水平的GDNF對顆粒細(xì)胞系的生長影響不同:高濃度的GDNF抑制細(xì)胞增殖,低濃度的GDNF促進(jìn)細(xì)胞增殖。其中100ng/ml較控制組顯著抑制(P<0.05),10ng/ml組則較控制組顯著促進(jìn)增殖(P<0.05)。
  4.10ng/mlGDNF處理 KGN細(xì)胞后對顆粒細(xì)胞的雌孕激素沒有顯著影響(P>0.05)。
  5.FSH及其受體mRNA在10ng/mlGDNF刺激后表達(dá)有改變

10、,表達(dá)量提高(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.人竇前卵泡體外培養(yǎng)過程中,在其培養(yǎng)液中加入10ng/mlGDNF,可以促進(jìn)竇前卵泡的體外發(fā)育。
  2.GDNF受體RET的mRNA在KGN細(xì)胞中有表達(dá),位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿。
  3.10ng/mlGDNF可以更好的刺激體外培養(yǎng)KGN細(xì)胞增殖,而其濃度過大可抑制細(xì)胞增殖。
  4.GDNF體外刺激KGN細(xì)胞,雌激素孕激素水平無顯著變化。
  5.GD

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