膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對凍融后人腔前卵泡體外發(fā)育的影響及異種移植的研究.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對凍融后人腔前卵泡體外發(fā)育的影響及異種移植的研究姓名：董方莉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生殖醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：孫瑩璞201203摘要方法l收集30例卵巢良性腫瘤手術(shù)患者的正常卵巢皮質(zhì)，其中部分采用免疫組化和RTPCR法檢測GDNF及其受體GDNF家族受體al(GDNFfamilyreceptoralphal，GFR—a1)和酪氨酸激酶受體RET(rearrangedduringtransfeetion

2、)的表達(dá)，部分將新鮮卵巢組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，其余均采用直接覆蓋玻璃化冷凍法(directcovervitrification，DCV)凍存。2凍融后卵巢組織行體外培養(yǎng)12天，按照體外培養(yǎng)液中不同濃度的GDNF和干細(xì)胞因子(stemcellfactor，SCF)分成6組：新鮮組、凍融組、lng／mlGDNF組、10ng／mlGDNF組、100ng／mlGDNF組和10ng／mlSCF組，比較凍融后卵巢組織經(jīng)體外培養(yǎng)后各級卵泡的比例及分泌雌二

3、醇(estradiol，E2)水平。3將體外培養(yǎng)后的卵巢組織進(jìn)行羧基熒光素乙酰乙酸琥珀酰亞胺酯(carboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylesterCFSE)和碘化丙啶(propidiumiodidePI)雙重?zé)晒馊旧?，激光共聚焦顯微鏡下觀察評價組織活性及卵泡存活率。結(jié)果1GDNF和GFRalPCR產(chǎn)物在所有卵巢組織標(biāo)本中均能檢測到，但其中15例患者僅表達(dá)GDNF亞型I，5例患者僅表達(dá)GDNF亞型II

4、，10例患者GDNF亞型I和II均表達(dá)。2GDNF、GFRal和RET在所有人卵巢組織卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中均陽性表達(dá)：GDNF、GFRal在胞漿及胞核內(nèi)均表達(dá)，GDNF胞漿內(nèi)的染色陽性率為97％，核內(nèi)陽性率為85％；GFR噸I胞漿內(nèi)的染色陽性率為93％，核內(nèi)陽性率為78％；RET主要在胞漿內(nèi)表達(dá)，染色陽性率為80％。3新鮮組和凍融組體外培養(yǎng)后各級卵泡比例和分泌E2水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，各組內(nèi)培養(yǎng)6天分泌的E2水平最高，顯著高于培