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1、Y784005中圖分類號:Q784瀘糾壓學(xué)院研究生碩士學(xué)位論文膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定二oO五年五月光度法測定A260/A280為19??俁NA未明顯降解。2以提取的總RNA為模板,GDNF的特異性上、下游引物做RTPCR后,瓊脂糖凝膠電泳得約650bp的片段,測序分析結(jié)果顯示為GDNFcDNA片段。3成功制備感受態(tài)大腸桿菌DH5Ⅱ后,限制性內(nèi)切酶HindIII、KpnI雙酶切pAdTraekCMV及,GDNF
2、cDNA,T4DNA連接酶連接酶切產(chǎn)物,將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5Q,接種到含有卡那霉素的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng),生長良好,見大量菌斑。4將于卡那霉素陽性培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌DH5Q提取質(zhì)粒,以提取的質(zhì)粒為模板,GDNF的特異性上、下游引物做PCR擴增后,瓊脂糖凝膠電泳得約650bp的片段。限制性內(nèi)切酶Hin棚I、XpnI酶切提取的質(zhì)粒后,瓊脂糖凝膠電泳得約650bp的片段和9200bp的片段。測序分析結(jié)果顯示GDNFcDNA插入方向正確
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