人白介素24基因重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定.pdf

1、目的: 病理性瘢痕包括增生性瘢痕與瘢痕疙瘩，其形成過程受到各種因素的影響。一般認(rèn)為它們是由創(chuàng)傷引起，以成纖維細(xì)胞的過度增生及膠原等大量細(xì)胞外基質(zhì)的過度產(chǎn)生和沉積為特征的皮膚纖維增生性疾病。病理性瘢痕的發(fā)病機(jī)理至今不甚清楚，但以往大量研究表明瘢痕的過度增生與細(xì)胞因子、癌基因和免疫反應(yīng)等密切相關(guān)。越來越多的研究表明人白介素24(interleukin 24，IL-24)具有重要的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有選擇性生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋

2、亡作用。重組腺病毒載體是目前應(yīng)用最廣泛的生物病毒載體之一，與其他病毒載體系統(tǒng)比較，具有明顯優(yōu)點(diǎn)：能將外源基因高效導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞；其轉(zhuǎn)染不依賴細(xì)胞分裂，既可轉(zhuǎn)染分裂期細(xì)胞，又可轉(zhuǎn)染非分裂期細(xì)胞；攜帶的外源基因不與宿主基因整合，對(duì)人致病性低。這些優(yōu)點(diǎn)使其成為一種高效而安全的基因轉(zhuǎn)移工具，廣泛應(yīng)用于基因治療的研究。我們既往的實(shí)驗(yàn)證實(shí)IL-24在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中的表達(dá)明顯低于正常皮膚及正常瘢痕，提示IL-24的表達(dá)降低可能與病理性瘢痕的

3、形成有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建含有人IL-24基因的重組腺病毒載體，為下一步轉(zhuǎn)染病理性瘢痕成纖維細(xì)胞，觀察IL-24在細(xì)胞中表達(dá)后對(duì)細(xì)胞增長(zhǎng)的影響奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法: TRIzol法提取皮膚成纖維細(xì)胞的總RNA后，利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增目的片斷IL-24；使用T4連接酶連接BglⅡ及XhoⅠ雙酶切后的目的片斷IL-24與pAdTrack-CMV，鑒定并擴(kuò)增正確重組腺病毒質(zhì)粒(pAdTrack CMV-IL-24)；挑選陽