EGFR shRNA表達載體的構(gòu)建及對卵巢癌移植瘤放療敏感性的影響.pdf

1、第一部分：EGFR shRNA表達載體的構(gòu)建及鑒定 目的：構(gòu)建針對EGFR基因家族序列特異性的shRNA表達載體，為本課題下一步研究提供有力工具。 方法：選擇放療不敏感的卵巢癌SKOV3細胞中高表達的EGFR基因為靶基因，根據(jù)siRNA的設(shè)計原則，設(shè)計針對EGFR基因序列的特異性表達載體（pGensil-1-E）及非特異性表達載體（pGensil-1-N）。體外合成兩段編碼短發(fā)夾RNA序列的DNA單鏈，退火，克隆到質(zhì)粒載

2、體pGensil-1的polⅢ啟動子下游，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和DNA測序進行鑒定。 結(jié)果：經(jīng)酶切和DNA測序表明，成功構(gòu)建了EGFR家族同源性基因的表達載體，pGensil-1-E及pGensil-1-N。 結(jié)論：本實驗成功構(gòu)建了針對EGFR家族同源性基因的表達載體。 第二部分 RNAi沉默EGFR基因?qū)β殉舶┮浦擦龇暖熋舾行缘挠绊?目的：應(yīng)用RNAi技術(shù)，將序列特異性的EGFR shRNA表達載體轉(zhuǎn)染卵

3、巢癌移植瘤，觀察EGFR基因?qū)β殉舶┓暖熋舾行缘挠绊憽?方法：應(yīng)用卵巢癌SKOV3細胞建立裸鼠移植瘤模型，隨機分為對照組、單純放療組、放療+pGenesil-1-E組，采用6MV X線照射裸鼠瘤組織，監(jiān)測三組瘤體積，治療后測量瘤質(zhì)量，取瘤組織行RT-PCR、Western Blot、免疫組化、電鏡檢測。 結(jié)果：治療后三組腫瘤體積差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），單純放療組、放療+pGenesil-1-E組的抑瘤率分別為