E1A基因?qū)m頸癌裸鼠移植瘤放射敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.探討E1A基因?qū)m頸癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制。 2.為提高宮頸癌的放射治療療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為腫瘤的基因治療提供初步理論依據(jù)。 方法： 細(xì)胞培養(yǎng)：人宮頸癌HeLa細(xì)胞在37℃，5﹪CO2條件下培養(yǎng)于含10﹪小牛血清，RPMI-1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人宮頸癌HeLa細(xì)胞接種于裸鼠右側(cè)肩胛下皮下，每只接種2×10<'6>個(gè)細(xì)胞，建立裸鼠移植瘤模型。每日觀察腫瘤生長(zhǎng)情

2、況，每三天測(cè)量一次腫瘤的長(zhǎng)短徑，計(jì)算腫瘤體積，V=1/2×(ab<'2>)。分組處理：待每組腫瘤平均直徑約10mm時(shí)，隨機(jī)將裸鼠分為三組，E1A實(shí)驗(yàn)組：瘤內(nèi)注射EIA質(zhì)粒與PEI-Fe<,3>O<,4>納米粒的膠體溶液0.2ml：空載體對(duì)照組：瘤內(nèi)注射PEI-Fe<,3>O<,4>納米粒空載體0.2ml：空白對(duì)照組：瘤內(nèi)注射無(wú)菌生理鹽水0.2ml。兩天后開始放療：將每組裸鼠分別進(jìn)行照射，6-MV X-ray源皮距100cm 2Gy/次×

3、5天，劑量率2Gy/min，總劑量10Gy，每天觀察腫瘤縮小情況，同樣每三天測(cè)量一次腫瘤體積，處死前測(cè)瘤體積，算出每組腫瘤縮小率=(放療前平均瘤體積-放療后平均瘤體積)/放療前平均瘤體積；處死裸鼠取標(biāo)本稱瘤重，算出各組平均瘤重。標(biāo)本制成病理切片，TUNEL法測(cè)瘤組織中細(xì)胞凋亡情況，計(jì)算每組的凋亡指數(shù)；免疫組化測(cè)survivin蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1.接種HeLa細(xì)胞后第7天開始成瘤，至第12天成瘤率達(dá)100﹪。

4、2.照射前E1A組，納米粒空載體組，空白對(duì)照組腫瘤體積分別為：302.28±37.48 mm<'3>，326.57±57.34 mm<'3>，317.95±86.93mm<'3>，照射結(jié)束后，處死裸鼠前E1A組，納米粒空載體組，空白對(duì)照組腫瘤體積分別為46.50±29.04 mm<'3>，222.4±37.47mm<'3>，202.83±67.51mm<'3>，腫瘤縮小率分別為84.62±14.25﹪，31.90±8.42﹪，36.21

5、±7.76﹪。瘤重分別為：148.1±69.7mg，434.9±38.7mg，394.3±88.6mg，E1A組腫瘤縮小率明顯高于對(duì)照組，瘤重明顯低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，空載體組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(p>0.05)。 3.TUNEL法測(cè)不同組中細(xì)胞凋亡情況，E1A組中凋亡細(xì)胞明顯多，凋亡指數(shù)為32.07±4.48﹪，而空載體組及空白對(duì)照組中凋亡細(xì)胞明顯少，分別為13.93±1.31﹪，14.02±0.98