重組人內(nèi)皮抑素-恩度對裸鼠宮頸癌移植瘤生長、轉(zhuǎn)移影響的研究.pdf

1、目的: 1.觀察恩度、恩度與順鉑聯(lián)合應用對宮頸癌Hela細胞裸鼠移植腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的影響。 2.觀察恩度對宮頸癌Hela細胞裸鼠移植腫瘤的血管新生、淋巴管新生的抑制作用及對腫瘤細胞超微結(jié)構(gòu)的影響。 3.檢測恩度對宮頸癌Hela細胞裸鼠移植腫瘤的血管內(nèi)皮生長因子-A，C，D(VEGF-A，VEGF-C，VEGF-D)表達情況的影響。 方法: 1.荷瘤裸鼠模型的建立雌性5～6周齡的裸鼠飼養(yǎng)在清潔級環(huán)境

2、中，常規(guī)收取表達熒光素酶的Hela細胞(精諾真公司惠贈)，制備細胞懸液(2.5×107/ml)。抽取0.2ml細胞懸液(5×106)接種在裸鼠左側(cè)肋腹部皮下，一般到接種后4天出現(xiàn)肉眼可見的腫瘤，模型建立成功。 2.實驗分組 待皮下腫瘤生長到長徑約0.7cm時，將裸鼠隨機分為五組，每組8只。五組分別為：對照組(生理鹽水組)、順鉑組、恩度組(10mg/kg)、小劑量恩度(10mg/kg)聯(lián)合順鉑組、大劑量恩度(20mg/kg

3、)聯(lián)合順鉑組。恩度隔1日瘤周皮下給藥一次，順鉑隔3日腹腔給藥一次，療程4周。 3.移植腫瘤生長情況的檢測應用“精諾真體內(nèi)成像系統(tǒng)”測量腫瘤的發(fā)光光子總數(shù)。待裸鼠皮下腫瘤生長到長徑約0.7cm時，開始照相。在照相前，每只裸鼠腹腔內(nèi)注射熒光素(150mg/kg)，注射15分鐘以后，應用異氟烷麻醉。麻醉成功后，將裸鼠放入成像裝置，調(diào)整好體位，照相。之后每周照相一次。 4 治療4周后，應用麻醉藥水合氯醛處死裸鼠。取出腫瘤組織，稱

4、重后按照不同的用途處理腫瘤組織，一部分用作光鏡標本應用4％多聚甲醛固定，一部分用作電鏡標本應用4％戊二醛固定。 5 分別用CD34作為血管標記物，LYVE-1作為淋巴管標記物，采用免疫組織化學法檢測移植瘤的微血管密度和微淋巴管密度。免疫組織化學法分別檢測移植瘤中VEGF-A，C，D的表達情況。 6 透射電鏡觀察裸鼠腫瘤細胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果: 1.恩度對裸鼠移植瘤生長情況的影響應用“精諾真體內(nèi)成像系統(tǒng)

5、”評價裸鼠腫瘤的活性，根據(jù)每次測量的光子數(shù)繪制腫瘤生長曲線，了解腫瘤的生長、變化情況。到實驗結(jié)束時，我們發(fā)現(xiàn)恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組光子數(shù)比單用順鉑組和生理鹽水組明顯減少(P<0.05)，但是恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組之間沒有差異(P>0.05)。 2.恩度對裸鼠一般情況的影響用藥物后順鉑組裸鼠活動明顯減少，飲食量下降，體重減輕，持續(xù)到實驗結(jié)束。生理鹽水組、恩度組、小劑量恩度聯(lián)合

6、順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組裸鼠體重一直持續(xù)增長至實驗結(jié)束。 3.恩度對裸鼠淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響實驗結(jié)束，解剖裸鼠時在腫瘤的附近可以發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。石蠟切片HE染色證實為癌轉(zhuǎn)移。大劑量恩度聯(lián)合順鉑組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組、恩度組、順鉑組、生理鹽水組裸鼠腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為0％(0/8)、12.5％(1/8)、12.5％(1/8)、62.5％(5/8)、75％(6/8)。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率

7、比單用順鉑組和生理鹽水組明顯降低(P<0.05)。 4 恩度對裸鼠腫瘤微血管密度(MVD)的影響以CD34作為血管內(nèi)皮細胞的標志物，血管內(nèi)皮細胞的胞漿被染成棕黃色。大劑量恩度聯(lián)合順鉑組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組、恩度組、順鉑組、生理鹽水組裸鼠腫瘤MVD平均值分別為10.88±1.38、10.25±1.22、10.83±2.29、15.58±2.31、22.08±1.93。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組MVD與單用

8、順鉑組和生理鹽水組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5 恩度對裸鼠腫瘤微淋巴管密度(MLD)的影響以LYVE-1作為淋巴管內(nèi)皮細胞的標志物，淋巴管內(nèi)皮細胞的胞漿被染成棕黃色。大劑量恩度聯(lián)合順鉑組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組、恩度組、順鉑組、生理鹽水組裸鼠腫瘤MLD平均值依次為5.00±0.63、5.17±0.75、6.00±0.63、14.33±

9、1.63、13.67±1.21。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組MLD與單用順鉑組和生理鹽水組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 6 恩度對裸鼠腫瘤表達VEGF-A,C，D的影響VEGF-A，C，D均表達在腫瘤細胞的細胞質(zhì)中，顯示為棕黃色的顆粒。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組VEGF-A，C，D的表達均較生理

10、鹽水組和順鉑組明顯降低(P<0.05)。恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 7 透射電鏡的觀察結(jié)果恩度組、小劑量恩度聯(lián)合順鉑組和大劑量恩度聯(lián)合順鉑組的裸鼠腫瘤細胞均發(fā)現(xiàn)有凋亡細胞，而在生理鹽水組和順鉑組內(nèi)可見大量變性壞死的細胞，未見凋亡細胞。 結(jié)論: 1.單用恩度、恩度聯(lián)合順鉑抑制Hela裸鼠皮下移植瘤的生長和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用優(yōu)于順鉑。 2.恩度能夠抑制H