RNAi抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞Survivin基因及其對(duì)順鉑敏感性影響的研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAi抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞Survivin基因及其對(duì)順鉑敏感性影響的研究姓名：薛芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：張愛(ài)榮20061207山東大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAi抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞Survivin基因及其對(duì)順鉑敏感性影晌的研究中文摘要專(zhuān)業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)研究生：薛芳指導(dǎo)教師：張愛(ài)榮副教授目的：宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位。晚期患者手術(shù)難以根治，放療、化療效果不理想，

2、因此，一提高化療藥物的敏感性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡成為改善晚期宮頸癌患者生活質(zhì)量的有效措施。Survivin基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞凋亡抑制基因，它位于17q25，是IAP基因家族(inhibitorofapoptosisproteins)qj的一員，它在人和鼠的胚胎和胎兒期及腫瘤組織中高度表達(dá)，而在正常分化成熟組織中幾乎不表達(dá)。研究證實(shí)Survivin基因的高表達(dá)與宮頸癌細(xì)胞的高耐藥性密切相關(guān)。因此，抑制Survivin基因表達(dá)有可能提

3、高宮頸癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，該基因有望成為宮頸癌基因治療的靶點(diǎn)。RNA干擾作為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種高效的，廣泛存在的，具有序列特異性的轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默過(guò)程。本研究利用RNAi技術(shù)抑制宮頸癌Hela細(xì)胞株Survivin基因，觀察Hela細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡、Survivin蛋白表達(dá)，及對(duì)順鉑藥物敏感性的變化，為宮頸癌的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：以培養(yǎng)的宮頸癌Hela細(xì)胞株為體外研究模型，設(shè)三組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：脂質(zhì)體組，對(duì)照組，RNAi組。脂

4、質(zhì)體組為脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染；對(duì)照組為pSilencerneosiRNAExpressionVectorkit中附帶的陰性對(duì)照，載體內(nèi)插入的片段為與人、鼠、兔的己知序列完全不相關(guān)的序列；RNAi組：利用文獻(xiàn)提供的目標(biāo)序列構(gòu)建抑制Survivin表達(dá)的RNAi載體(pSSURV)，并轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞。(1)半定量RTPCR檢測(cè)SurvivinmRNA，Westernblot法檢測(cè)Survivin蛋白在脂質(zhì)體組、對(duì)照組、RNAi組中的表達(dá)情況