泛耐藥鮑曼不動桿菌與其主動外排泵蛋白的相關性研究.pdf

1、目的:
　　了解臨床出現(xiàn)的鮑曼不動桿菌對19種常用抗菌藥物的耐藥情況;探討鮑曼不動桿菌主動外排泵在耐藥方面的作用、基因表達;觀察外排泵抑制劑改變鮑曼不動桿菌耐藥的情況，指導臨床合理使用抗生素，提高泛耐藥鮑曼不動桿菌治療效果，改善患者預后有重要意義，同時為研制開發(fā)新的抗菌藥物提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1隨機收集非重復鮑曼不動桿菌共142株，并測定19種抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC):阿米卡星、慶大霉素、氨芐西林、

2、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、美羅培南等藥物。
　　2羰基氰氯苯腙(CCCP)泵抑制劑對菌株MIC的影響:抗生素二倍稀釋系列培養(yǎng)基中聯(lián)用泵抑制劑，同時制備僅含泵抑制劑的培養(yǎng)基作為生長對照。比較應用CCCP泵抑制劑前后MIC值的變化，以加入泵抑制劑后MIC值比不加泵抑制劑降低4倍或以上作為外排泵表型陽性的判定標準。
　　3對外排泵陽性株進行外排泵蛋白基因的檢測和

3、分析:提取外排泵表型陽性株DNA，用PCR擴增主動外排系統(tǒng)調(diào)控基因并測序，擴增產(chǎn)物以1.5％的瓊脂糖凝膠進行電泳，凝膠成像分析系統(tǒng)對電泳帶進行照相和灰度掃描。
　　4用WHONET統(tǒng)計軟件和SPSS13.0進行數(shù)據(jù)處理
　　結(jié)果：
　　1142株臨床鮑曼不動桿菌分離菌株的主要來源分別是是痰液(72.6％)、分泌物(11.3)，而鮑曼不動桿菌菌株高發(fā)于ICU(40.8％)、呼吸內(nèi)科(14.8％)。
　　2142株臨

4、床鮑曼不動桿菌分離菌株對19藥物敏感測定結(jié)果顯示，對多粘菌素B的敏感率100％，四環(huán)素的耐藥率最高94.5％，對諾氟沙星、慶大霉素、頭孢噻肟、氨芐西林耐藥率達90％以上，亞胺培南和美羅培南耐藥率分別為34.5％、36.6％。共篩選出多重耐藥及泛耐藥菌96株。
　　3篩選出的96株多重耐藥及泛耐藥鮑曼不動桿菌在加入CCCP前后，慶大霉素耐藥率降低65.63％，耐藥菌株數(shù)減少63株，四環(huán)素、諾氟沙星、頭孢噻肟MIC值降低4倍及以上分別

5、有32株、41株、29株。對四種抗生素MIC值均降低4倍及以上34株。
　　4從34株鮑曼不動桿菌檢測到adeB、adeR、adeS、adeJ、adeE、abeM基因分別有33株、32株、33株、33株、0株、33株，檢出率分別為97.06％、94.12％、97.06％、97.06％、0.00％、97.06％。
　　5對adeB、adeR、adeS、adeJ、abeM基因進行測序，結(jié)果顯示與Genebank中參考菌株序列同源

6、性為100％，未發(fā)現(xiàn)基因變異現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　1臨床鮑曼不動桿菌分離菌株對臨床多種常用的抗菌藥物存在普遍耐藥。
　　2對篩選的96株多重耐藥及泛耐藥鮑曼不動桿菌進行CCCP處理后，34株(35.42％)對最耐藥的四種抗生素的MIC值均降低4倍及以上。
　　3從34株可能由于外排泵的存在而產(chǎn)生耐藥的鮑曼不動桿菌檢出adeB、adeR、adeS、adeJ、abeM。
　　4耐藥基因adeB、adeR、ad