體外誘導(dǎo)鮑曼不動桿菌突變耐藥與主動外排機制的相關(guān)性研究.pdf

1、前言：
　　 鮑曼不動桿菌是一種革蘭氏陰性非發(fā)酵菌,廣泛分布于自然界及人體皮膚機體免疫力下降時可引起嚴重感染,如呼吸相關(guān)性肺炎(VAP)、敗血癥、泌尿系感染、腦膜炎等,故成為院內(nèi)感染的重要病原體。在過去十年,隨著現(xiàn)代先進診療技術(shù)的丌展,抗生素和免疫制劑的臨床廣泛使用,鮑曼不動桿菌形成單一耐藥到多重耐藥或全耐藥、低耐藥率到高耐藥率的發(fā)展趨勢,引起嚴重致死性院內(nèi)感染的主要病原菌,抵抗所有常用的革蘭陰性抗菌劑,致使臨床用藥陷入困境,已

2、成為一個重要的全球性問題。因此從誘導(dǎo)多重耐藥機制的研究入手尋求解決辦法成為一種必然趨勢?，F(xiàn)有研究表明主動外排機制是促使鮑曼不動桿菌耐藥的一個重要因素,adeB基因在介導(dǎo)鮑曼不動桿菌耐藥中發(fā)揮重要作用,這種編碼外排系統(tǒng)基因的高表達導(dǎo)致了鮑曼不動桿菌的高耐藥和多重耐藥,可致對氨基糖苷類、β-內(nèi)酰胺類、喹諾酮、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、溴乙錠等多種藥物耐藥。故本研究擬通過體外誘導(dǎo)鮑曼不動桿菌突變耐藥試驗,分析敏感菌株同其誘導(dǎo)耐藥菌株間adeB主

3、動外排編碼基因表達量的變化差異,驗證主動外排機制在鮑曼不動桿菌突變耐藥中的意義。
　　 目的：
　　 了解阿米卡星、奈替米星和亞胺培南在體外分別單獨誘導(dǎo)鮑曼不動桿菌耐藥株的情況;同時分別比較敏感菌株與體外誘導(dǎo)突變穩(wěn)定耐藥菌株間主動外排系統(tǒng)adeB表達量的情況;并觀察外排泵抑制劑存在下對敏感菌株及穩(wěn)定突變耐藥菌株耐藥水平影響程度的差異,以探討鮑曼不動桿菌耐藥性變化與主動外排系統(tǒng)表達間的關(guān)系。
　　 實驗材料和方法：

4、
　　 標(biāo)本來源于2009年1月至2010年12月中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離的血液或引流物,分別對阿米卡星、奈替米星和亞胺培南敏感的鮑曼不動桿菌(各有19、17和25株),均為非重復(fù)菌株(同一病人只收集一株菌)。采用微量肉湯稀釋法分別測定對阿米卡星、奈替米星和亞胺培南的最低抑菌濃度(MIC),同時分別用上述三種藥物進行體外誘導(dǎo)耐藥試驗:并觀察敏感菌株和耐藥株在CCCP存在條件下MIC值的變化程度;予以實時熒光定量ORT-P

5、CR方法測定敏感菌株與誘導(dǎo)耐藥后外排泵編碼基因adeB表達量的差異。
　　 結(jié)果：
　　 篩選的分別對阿米卡星、奈替米星和亞胺培南敏感菌株分別為19、17和25株。由阿米卡星、奈替米星和亞胺培南各自進行體外誘導(dǎo)耐藥產(chǎn)生的穩(wěn)定耐藥菌株分別有11、15和8株:全部敏感菌株和亞胺培南突變耐藥菌株在含CCCP的條件下MIC值最大降低2倍,呈外排表型陰性,而阿米卡星、奈替米星突變耐藥菌株在含CCCP的條件下分別有10、14株MIC

6、值降低4倍或4倍以上,呈明顯的外排作用;實時定量QRT-PCR方法結(jié)果顯示敏感菌株以及亞胺培南突變耐藥菌株的adeB外排泵編碼基因均陰性,而阿米卡星和奈替米星突變耐藥菌株分別有10和5株表達adeB基因。
　　 討論：
　　 鮑曼不動桿菌形成單一耐藥到多重耐藥或全耐藥、低耐藥率到高耐藥率的發(fā)展趨勢,已成為引起嚴重致死性院內(nèi)感染的主要病原菌,抵抗所有常用的革蘭陰性抗菌劑,已成為一個重要的臨床全球問題。
　　 結(jié)果顯

7、示,鮑曼不動桿菌菌株對不同抗生素的反應(yīng)是不同的,由于外排泵系統(tǒng)作用。對外排泵抑制劑CCCP與QRT-PCR法結(jié)果并不一樣,說明外排泵抑制劑并不能完全反映主動外排泵adeB的情況:耐藥菌株不僅存在AdeABC外排系統(tǒng),可能還存在其它外排泵機制的介導(dǎo),或還存在其他重要的耐藥機制,如ESBLs酶、外膜通透性的改變與丟失等,有待后期實驗進一步研究。
　　 長時間、不規(guī)范應(yīng)用低于正常殺菌劑量的抗生素容易誘導(dǎo)出細菌的耐藥性,也正是細菌耐藥最

8、常見的原因之一。本試驗通過體外藥物誘導(dǎo)證實了鮑曼不動桿菌可在長期低劑量的接觸抗菌藥物后產(chǎn)生耐藥性變異,形成耐藥菌證明此點。因此,合理使用抗菌藥,加強對耐藥菌株的監(jiān)控檢測及治療,可減少或避免耐藥株的傳播及暴發(fā)流行,也是預(yù)防及減少醫(yī)院條件致病菌感染及耐藥性形成傳播的重要風(fēng)險管理對策。
　　 結(jié)論：
　　 本試驗通過體外藥物誘導(dǎo)試驗證實了敏感的鮑曼不動桿菌可在長期低劑量的接觸抗菌藥物后產(chǎn)生耐藥性變異,誘導(dǎo)耐藥過程中除了主動外排