中國西南地區(qū)漢族人群BAG3基因單核苷酸多態(tài)性與擴張型心肌病的相關性研究.pdf

1、目的:研究表明20％-35％的擴張型心肌病(Dilated Cardiomyopathy, DCM)有明顯的家族遺傳史，目前已經發(fā)現(xiàn)的同DCM發(fā)病相關的基因有30余種，大多數(shù)都是編碼細胞骨架和肌纖維節(jié)相關的蛋白質，例如TNNT2、DES、MYH7、ACTN2、ACTC、TTN等。近期發(fā)現(xiàn)位于肌小節(jié)的Z盤結構上并在該結構上呈現(xiàn)高表達水平的Bcl-2相關抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associatedathanogene3，BAG3)的基因變

2、異同DCM相關。2011年，Villard E首次報道了BAG3基因上的rs2234962多態(tài)位點與DCM導致的心衰有關，提示BAG3基因可能是導致DCM發(fā)病的候選基因，隨后在日本家族性DCM患者中也發(fā)現(xiàn)BAG3基因突變點Arg218Trp和Leu462Pro以及相關的多態(tài)點(rs3858339、rs196295、rs117671123、rs78439745、rs3858340)與DCM有關。但是在中國西南地區(qū)漢族人群中是否也存在BAG

3、3基因的變異，以及其變異是否與DCM發(fā)病相關，目前尚無相關研究證實。故本實驗通過研究BAG3基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)與中國西南地區(qū)漢族人群擴張型心肌病的相關性，來探討擴張型心肌病的遺傳學發(fā)病機制。
　　方法:研究對象選取中國西南地區(qū)的漢族人群，采用病例對照研究，將BAG3基因的4個外顯子作為擴增的目的序列。從144例DCM患者(DCM組)和156例健康對照者（

4、對照組）外周血中提取DNA作為擴增的模板，設計引物后采用聚合酶鏈擴增反應(PCR)擴增DCM組和對照組的目的序列，運用雙脫氧核糖核酸鏈末端終止測序的方法（Sanger測序法）測定兩組擴增產物的堿基序列，分析所得的序列圖，并將測得的堿基序列同數(shù)據(jù)庫中BAG3基因4個外顯子的堿基序列進行比對，得出與DCM相關的SNPs或突變點，再統(tǒng)計出兩組相關SNPs的基因型和等位基因頻率，用卡方檢驗比較DCM組和對照組之間多態(tài)位點的基因型頻率和等位基因頻

5、率的統(tǒng)計學差異。
　　結果:
　　1.本研究未在中國西南地區(qū)漢族人群中發(fā)現(xiàn)曾在日本人群中報道過的與DCM發(fā)病相關的Arg218Trp(c.652C＞T, rs397514506)和Leu462Pro(c.1385T＞C，rs397514507)兩個突變位點，這兩個基因突變分別位于BAG3基因的第3和第4外顯子上，同時也未在該基因上發(fā)現(xiàn)同DCM相關的其他突變位點。
　　2.在中國西南地區(qū)漢族人群中發(fā)現(xiàn)了6個同DCM相關的

6、BAG3基因多態(tài)位點，主要位于第3、4外顯子上，而未在第1、2外顯子上發(fā)現(xiàn)相關的多態(tài)點。發(fā)現(xiàn)的相關多態(tài)點分別是rs117671123（位于第3外顯子c.772C＞T，Arg258Arg）、rs3858339(位于第4外顯子c.1002T＞G，Pro334Pro)、rs3858340(位于第4外顯子c.1220C＞T，Pro407Leu)、rs196295（位于第4外顯子c.1296A＞G，Va1432Val）、rs374858685(位

7、于第4外顯子c.1299A＞G，Gln433Gln)、rs149358702(位于第4外顯子c.1587C＞T, Ala529Ala)，其中rs117671123、rs196295、rs3858339、rs3858340等位點也在日本人群中報道過。
　　3.發(fā)現(xiàn)位于第4外顯子上的rs196295多態(tài)位點與對照組相比有顯著差異，rs196295多態(tài)位點的AG+GG基因型頻率和G等位基因頻率在DCM組明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（分別為

8、75％和51.3％、45.8％和29.5％，均P＜0.05）。此外，DCM組的AG+GG基因型和G等位基因與對照組相比OR值分別為2.85、2.02，即攜帶有AG+GG基因型和G等位基因者發(fā)生DCM的危險性是健康者的2.85、2.02倍。兩組基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)。
　　4.發(fā)現(xiàn)位于第4外顯子上的rs3858339多態(tài)點的TG基因型頻率及G等位基因頻率與第4外顯子上的rs3858340

9、多態(tài)點的CT基因型頻率及T等位基因頻率相同，在DCM組分別為42.4％、21.2％，在對照組分別為39.7％、19.9％，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　5.發(fā)現(xiàn)位于第3外顯子上的rs117671123多態(tài)點和位于第4外顯子上的rs374858685、rs149358702多態(tài)點在對照組中無基因變異，在DCM組中雖未發(fā)現(xiàn)純合子改變，但發(fā)現(xiàn)有雜合子改變，其中rs117671123多態(tài)點CT基因型頻率為1.4％，rs37485

10、8685多態(tài)位點AG基因型頻率為0.7％，rs149358702多態(tài)位點CT基因型頻率為0.7％;而位于rs117671123上的T等位基因頻率、rs374858685上的G等位基因頻率、rs149358702上的T等位基因頻率分別為0.7％、0.3％、0.3％，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論:
　　1.中國西南地區(qū)漢族人群DCM患者中不存在日本人群中報道的與DCM發(fā)病相關的突變點Arg218Trp(c.65

11、2C＞T)和Leu462Pro(c.1385T＞C)，該突變點的致病可能同遺傳背景的差異及環(huán)境因素的影響有關。
　　2.中國西南地區(qū)漢族人群在BAG3基因的4個外顯子上都不存在與DCM相關的基因突變位點。
　　3.位于BAG3基因第4外顯子上的rs196295單核苷酸多態(tài)性可能與中國西南地區(qū)漢族人群DCM相關，攜帶有該位點AG+GG基因型和G等位基因者可能使DCM的發(fā)病風險增高，這可能是DCM發(fā)生的遺傳易感因素。