FAS凋亡通路基因單核苷酸多態(tài)性與中國(guó)漢族人群白癜風(fēng)相關(guān)性的研究.pdf

1、白癜風(fēng)是皮膚科常見的以表皮黑素細(xì)胞破壞為特征的皮膚色素脫失性疾病。其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，不同學(xué)者就其病因及發(fā)病機(jī)理提出多種學(xué)說，如自身免疫學(xué)說、神經(jīng)學(xué)說、黑素細(xì)胞自毀學(xué)說、遺傳學(xué)說、黑素細(xì)胞生長(zhǎng)因子缺乏學(xué)說等。但任何單一學(xué)說均不能完全解釋白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)理。有學(xué)者認(rèn)為多因素、多基因累積共同導(dǎo)致了白癜風(fēng)的發(fā)生，不同的個(gè)體可能存在不同病因的組合，其中遺傳基因的易感性在其中占據(jù)了重要的地位。近年來白癜風(fēng)細(xì)胞免疫現(xiàn)象受到高度關(guān)注。
　　Fas

2、（APO-1/CD95），屬TNF受體家族，F(xiàn)as與其配體（FasL）結(jié)合可以啟動(dòng)Caspase的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase家族是一組結(jié)構(gòu)特征相似的半胱氨酸蛋白酶，是凋亡的中心調(diào)節(jié)者，可分為ICE亞族和CED-3家族，前者參與炎癥反應(yīng)，后者參與細(xì)胞凋亡，又分為兩類：一類為執(zhí)行者，如Caspase-3、6、7，它們可直接降解胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白，引起凋亡，但不能通過自催化或自剪接的方式激活；另一類為啟動(dòng)者，如Caspase

3、-8、9、10，受到信號(hào)后，能通過自剪接而激活，然后引起Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。Fas基因和Caspase基因功能性單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)會(huì)改變轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而影響表達(dá)水平。
　　白癜風(fēng)、Fas凋亡通路和免疫三者之間關(guān)系密切。白癜風(fēng)的發(fā)病與T淋巴細(xì)胞所致的黑素細(xì)胞破壞密切相關(guān)。Fas凋亡通路參與了外周淋巴器官中T細(xì)胞的清除。白癜風(fēng)患者皮損、PBLC上和循環(huán)中有Fas/FasL及sFas/sFasL的異常表達(dá)。sFas通過膜結(jié)合

4、受體的蛋白裂解或由mRNA選擇性剪接而產(chǎn)生。有報(bào)道顯示白癜風(fēng)患者血清中sFas水平較正常人明顯增高。先前研究還顯示：阻斷Fas和FasL的相互作用可以在類似于白癜風(fēng)的轉(zhuǎn)基因小鼠模型上部分抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的黑素細(xì)胞的破壞。目前還沒有關(guān)于Fas/FasL基因多態(tài)性與白癜風(fēng)相關(guān)性的研究，從基因水平探索Fas凋亡通路與白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性，可以從遺傳學(xué)和免疫學(xué)角度闡明和完善白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制，為白癜風(fēng)的防治提供新思路和理論依據(jù)，并為其他多基因疾病，尤其

5、是與免疫密切相關(guān)的多基因疾病的研究奠定基礎(chǔ)。
　　聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)是一種檢測(cè)基因多態(tài)性的方法。不同個(gè)體基因的限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)堿基不同導(dǎo)致基因的序列發(fā)生變化，這種變化可以通過特定探針雜交進(jìn)行檢測(cè)，從而可比較不同個(gè)體的基因多態(tài)性。
　　目的：分析Fas凋亡通路Fas和Caspase基因單核苷酸多態(tài)性與中國(guó)漢族人群白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性，以及相關(guān)的功能學(xué)初步研究，探討白癜風(fēng)的遺傳學(xué)背景

6、及發(fā)病機(jī)制，為白癜風(fēng)的診斷和預(yù)后提供新的指標(biāo)。
　　方法：應(yīng)用病例-對(duì)照研究方法，在中國(guó)漢族人群中選取無血緣關(guān)系的白癜風(fēng)患者和性別、年齡與之相配比的正常人群作為研究對(duì)象，收集外周血，提取基因組DNA，應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)，探索了Fas凋亡通路中Fas、FasL和Caspase基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性位點(diǎn)與白癜風(fēng)易感性的關(guān)系，并采用ELISA法檢測(cè)了血清sFas水平。
　　結(jié)果：
　　1.白癜風(fēng)患者Fas-1377G>A位

7、點(diǎn)基因型頻率在患者組中和正常對(duì)照組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.015），在Fas-670A>G位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)果，提示在中國(guó)漢族人群中Fas-1377基因多態(tài)性與白癜風(fēng)發(fā)病易感性具有相關(guān)性。
　　2.Fas-1377和Fas-670位點(diǎn)存在連鎖不平衡現(xiàn)象（D′=0.784，P<0.001），F(xiàn)as-AA單體型在兩組間有顯著差異（分別為6.5％和2.4％，P<0.001），且與白癜風(fēng)發(fā)病危險(xiǎn)性相關(guān)（校正OR值3.29，95％可信

8、區(qū)間2.05-5.29）。
　　3.具有Fas-1377（AG+AA）/-670（AG+AA）合并基因型的個(gè)體發(fā)病危險(xiǎn)性較高（校正OR值1.44，95％可信區(qū)間1.15-1.79）。
　　4.包含3-4個(gè)危險(xiǎn)等位基因的個(gè)體白癜風(fēng)發(fā)病危險(xiǎn)性較高（校正OR值2.87，95％可信區(qū)間1.90-4.32）。
　　5.女性（校正OR值1.53，95％可信區(qū)間1.12-2.10）、非節(jié)段型白癜風(fēng)（校正OR值1.32，95％可信區(qū)間

9、1.07-1.62）、發(fā)病年齡≤20歲（校正OR值1.36，95％可信區(qū)間1.05-1.77）和無家族史（校正OR值1.33，95％可信區(qū)間1.07-1.65）的白癜風(fēng)患者發(fā)病危險(xiǎn)性較高。
　　6.患者組血清sFas（2.03±1.23ng/ml）明顯高于對(duì)照組（1.26±0.66ng/ml）（P<0.05），但是不隨Fas-1377基因型別而改變。
　　7.CASP8-652和CASP10I522L兩位點(diǎn)呈高度連鎖不平衡（

10、D'=0.934，P<0.001），但是在患者組和對(duì)照組間未發(fā)現(xiàn)任何有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。
　　結(jié)論：本研究首次研究和探索了Fas凋亡通路SNP與白癜風(fēng)易感性的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Fas-1377位點(diǎn)與白癜風(fēng)易感性相關(guān)，并在此基礎(chǔ)上合理地提出“處于Fas啟動(dòng)子區(qū)的SNPs可能通過影響該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，影響細(xì)胞免疫功能，并進(jìn)而導(dǎo)致黑素細(xì)胞損傷，增加白癜風(fēng)的發(fā)病危險(xiǎn)性”這一全新的假說，對(duì)揭示Fas凋亡通路功能性SNPs在白癜風(fēng)發(fā)生過程中的可能機(jī)制