抗人IgM抗體對鼻咽癌HNE-1細胞裸鼠成瘤及IgM、gp96蛋白表達的影響.pdf

1、目的:盡管鼻咽癌的診斷和治療方法都在不斷進步,但對其早期診斷與預后判斷還缺乏有效的手段,患者的5年生存率還有待進一步提高；因而我們需要在鼻咽癌發(fā)病機制理論研究領域取得突破性進展,尋找新的靶點,以提高其早期診斷水平和整體治療效果。本實驗通過研究抗人IgM抗體對鼻咽癌HNE-1細胞裸鼠移植瘤生長、腫瘤細胞凋亡以及免疫球蛋白M(IgM)、糖蛋白gp96(Glycoprotein96,gp96)表達的影響,以期探討IgM在鼻咽癌中異位表達的生物

2、學活性以及抗人IgM抗體影響裸鼠成瘤的可能機制。
　　 方法:對鼻咽癌HNE-1細胞進行傳代培養(yǎng),制成細胞懸液,接種于Balb／c-nu／nu裸鼠右側(cè)背腹部皮下,建立鼻咽癌移植瘤模型；15只荷瘤裸鼠隨機分為實驗組(腹腔注射抗人IgM抗體,1.5mg／裸鼠,分5次,每隔3天1次)、IgG對照組(腹腔注射IgG抗體)及PBS對照組(腹腔注射PBS),同時觀察裸鼠移植瘤生長情況,定期(每四天)稱量裸鼠體重并以游標卡尺測量移植瘤的長徑及

3、短徑,繪制腫瘤生長曲線,計算腫瘤體積=腫瘤長徑×腫瘤短徑2／2。5次腹腔給藥后觀察1周,處死裸鼠,取瘤體,稱量移植瘤重量,計算抑瘤率。常規(guī)HE染色觀察移植瘤光鏡下改變,并取裸鼠主要內(nèi)臟行HE染色。采用TUNEL技術檢測鼻咽癌HNE-1細胞裸鼠移植瘤組織中細胞凋亡情況,采用圖像分析系統(tǒng)計算凋亡指數(shù)；同時利用免疫組化SP法檢測裸鼠移植瘤組織中IgM、gp96蛋白的表達情況,同樣采用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測定。
　　 結(jié)果:(1)

4、成功構建出人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,三組裸鼠均有鼻咽癌原位移植瘤生長,成瘤率100％；其瘤組織經(jīng)病理切片檢查證實為鼻咽癌,且在實驗期內(nèi),三組動物全部存活。(2)三組裸鼠飲食正常,活動自如,精神狀態(tài)良好,無1只死亡；其心、肝、脾、肺、腎組織形態(tài)觀察無明顯差異。(3)抗人IgM抗體干預組裸鼠移植瘤體積為(26.73±16.51)mm3,較IgG對照組(204.97±151.88)mm3和PBS對照組(230.16±167.78)mm3明顯減小

5、,三組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；抗人IgM抗體干預組裸鼠體重為(21.10±2.35)g,而IgG對照組為(20.70±3.29)g,PBS對照組(20.01±2.22)g,三組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；抗人IgM抗體干預組裸鼠移植瘤重量(0.09±0.07)g,較IgG對照組(0.35±0.10)g和PBS對照組(0.38±0.08)g明顯減小,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；同時計算抑瘤率分別為74

6、.45％和76.84％。(4)TUNEL法檢測鼻咽癌HNE-1細胞裸鼠移植瘤組織中細胞凋亡水平,抗人IgM抗體干預組腫瘤細胞平均凋亡指數(shù)為(1.50±0.76)％,較IgG對照組(0.49±0.15)％和PBS對照組(0.42±0.20)％明顯升高,三組間差異經(jīng)統(tǒng)計學分析有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；(5)免疫組織化學SP法檢測裸鼠移植瘤組織中IgM、gp96蛋白表達,抗人IgM抗體干預組IgM蛋白表達的平均光密度值為(0.01±0.0

7、1),與IgG對照組(0.06±0.03)和PBS對照組(0.05+0.03)相比均顯著下降,三組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；抗人IgM抗體干預組gp96蛋白表達顯著下降(0.05±0.01),經(jīng)統(tǒng)計學分析與IgG對照組(0.10±0.03)和PBS對照組(0.11±0.02)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)抗人IgM抗體能顯著抑制人鼻咽癌HNE-1細胞裸鼠移植瘤生長,提示鼻咽癌異位表達的IgM