人-人嵌合型抗甲型肝炎病毒IgM抗體檢測(cè)質(zhì)控物研究.pdf

1、目的： 本研究擬用化學(xué)交聯(lián)方法構(gòu)建一種人—人抗體嵌合物作為抗—甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，HAV)IgM抗體檢測(cè)質(zhì)控品，并探討其在臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法： 一、嵌合抗體的構(gòu)建 通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)篩選出抗—HAV IgG陽(yáng)性效價(jià)高的血清(抗HIV—1、HBsAg陰性，抗—HEV、抗—HCV、梅毒抗體陰性)，再以蛋白A柱純化出含高滴度抗—HAV IgG的人總IgG，以分子篩色譜純化出健康

2、人IgM抗體。選擇1—乙基—3[3—二甲基氨基丙基]碳二亞胺作為化學(xué)交聯(lián)劑將兩者交聯(lián)，得到的嵌合人—人IgG、IgM抗體既能和甲型肝炎病毒抗原(Hepatitis A Virus Antigen，HAV—Ag)特異性結(jié)合，又能與檢測(cè)體系中的抗μ鏈抗體特異結(jié)合。根據(jù)嵌合抗體的抗—HAVIgM活性來(lái)確定交聯(lián)反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件，并對(duì)該嵌合抗體的干擾反應(yīng)、交叉反應(yīng)進(jìn)行研究，同時(shí)以衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的抗—HAV IgM質(zhì)控品作為對(duì)照研究該嵌合抗體

3、的適用性。 二、嵌合抗體作為質(zhì)控物穩(wěn)定性及通用性研究 對(duì)本嵌合抗體的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，對(duì)不同稀釋保存液(包括BSA、組氨酸、山梨醇等添加劑組分及濃度)進(jìn)行篩選，尋找使嵌合抗體穩(wěn)定保存的條件。穩(wěn)定性的保存條件：將上述1:1000倍稀釋后及未稀釋的嵌合抗體質(zhì)控物置于4℃、—20℃、室溫、37℃、及—70℃/室溫反復(fù)凍融3次的條件下保存不同時(shí)間觀察其穩(wěn)定性。分別采用萬(wàn)泰、新創(chuàng)及雅培商品試劑盒對(duì)本嵌合抗體進(jìn)行檢測(cè)，考察其通用性。

4、 結(jié)果： 一、嵌合抗體的構(gòu)建 本研究的最佳交聯(lián)反應(yīng)條件為IgG與IgM質(zhì)量比5：1(5mg IgG/1mg IgM)，每mg IgM反應(yīng)體系中加入10 mg交聯(lián)劑，室溫反應(yīng)6～18 h。交聯(lián)后得到了穩(wěn)定的嵌合抗體產(chǎn)物，且抗—HAV IgM檢測(cè)滴度達(dá)到1：20000。將該產(chǎn)物1:1000倍稀釋后，檢測(cè)值仍與衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心發(fā)放的抗—HAV IgM質(zhì)控品相當(dāng)，能夠作為抗—HAV IgM檢測(cè)的陽(yáng)性質(zhì)控。干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明

5、，作為反應(yīng)物的IgG、IgM及交聯(lián)劑不影響嵌合抗體的陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，且該嵌合抗體在抗—HBc IgM、抗—HEV IgM檢測(cè)中不存在交叉反應(yīng)。 二、嵌合抗體質(zhì)控物穩(wěn)定性研究及通用性研究 本嵌合抗體在4℃條件下能穩(wěn)定保存至少3個(gè)月，經(jīng)過(guò)稀釋保存液即含1％BSA、10 mmol/L組氨酸的PBS溶液1000倍稀釋后，于4℃及—20℃條件下可以穩(wěn)定保存至少4個(gè)月。本嵌合抗體采用以上3個(gè)廠家的商品試劑盒均能檢出陽(yáng)性結(jié)果，具有一定的