心房神經(jīng)節(jié)叢消融對犬竇房結(jié)與房室結(jié)功能與結(jié)構(gòu)的遠(yuǎn)期影響.pdf

1、GP消融可以影響心臟ANS功能，預(yù)防和抑制房顫的發(fā)作，但GP消融導(dǎo)致的去神經(jīng)效應(yīng)會不同程度地破壞心臟內(nèi)在ANS，這可能影響SAN與AVN的功能與結(jié)構(gòu)。因此，GP消融的安全性問題，尤其是對SAN的變時功能與AVN的變傳導(dǎo)功能的影響應(yīng)該受到重視。目前，GP消融對SAN和AVN電生理功能的急性期影響尚無定論，且缺乏關(guān)于GP消融對SAN和AVN功能與結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)期影響的依據(jù)，據(jù)此，本研究采用解剖定位結(jié)合高頻刺激的方法定位犬的ARGP和IRGP，并進行

2、射頻消融，觀察消融后即刻與1、6、12個月后的SAN和AVN電生理功能的變化，并觀察ARGP所支配的SAN與IRGP所支配的AVN細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，以及SAN和ANV組織連接蛋白（Connexin，Cx）43和45表達的長期動態(tài)變化，目的在于探討ARGP和IRGP消融的近期和遠(yuǎn)期安全性，為保證GP消融的臨床安全應(yīng)用提供理論依據(jù)。本研究的主要內(nèi)容包括兩個部分:
　　第一部分 心房神經(jīng)節(jié)叢消融對犬竇房結(jié)與房室結(jié)電生理功能的遠(yuǎn)期影響

3、　　目的：
　　GP消融是房顫的重要治療方法，目前GP消融對SAN與AVN電生理功能的急性期影響尚不明確，更是缺乏長期、動態(tài)的觀察。本研究旨在觀察消融正常犬模型的心房ARGP和IRGP對SAN與AVN的電生理功能影響，探討GP消融的安全性，為GP消融的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　取24條雜種犬為研究對象，應(yīng)用3％戊巴比妥鈉靜脈注射麻醉。行氣管切開并插管，給予呼吸機輔助呼吸。記錄肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖，并分別經(jīng)頸內(nèi)靜

4、脈和股靜脈放置心內(nèi)電極導(dǎo)管2根至高位右房和希氏束，記錄右房和希氏束電圖。應(yīng)用多功能電生理刺激和記錄儀測定SAN及AVN功能。
　　1.SAN功能包括靜息心率、不同周長起搏(330ms、300ms、280ms、250ms)時SAN恢復(fù)時間(SNRT)及校正的SNRT(cSNRT)，起搏脈寬2ms，強度為10倍起搏閾值，每次起搏持續(xù)2 min，暫停2min后進行下一次起搏。SNRT測定:應(yīng)用多功能電生理儀對高位右房進行快速起搏，引起S

5、AN的抑制，當(dāng)停止起搏時，最后一個起搏波至第一個恢復(fù)的竇性心房波之間的時間為SNRT; cSNRT: SNRT減去起搏前正常的竇性間期。
　　2.AVN功能包括不同周長起搏(330ms、300ms、280ms、250ms)的AH間期、誘發(fā)心房顫動時的平均心室率（應(yīng)用多功能電生理刺激儀進行右房短陣超速起搏誘發(fā)房顫[S1S1=100 ms]，平均心室率為房顫時10個心室搏動的平均周長）、AVN前傳不應(yīng)期（采用S1S2程序刺激，S1∶S

6、2=8∶1，遞減步長10ms）及遞增起搏時出現(xiàn)文氏和2∶1房室傳導(dǎo)阻滯(AVB)時的起搏周長。
　　SAN和AVN電生理功能檢測完畢后，實驗犬左側(cè)臥位，經(jīng)右側(cè)第四肋間開胸，暴露心臟，辨認(rèn)右心房、上下腔靜脈、右肺靜脈等重要的解剖位置。ARGP和IRGP定位:(1)解剖定位:ARGP位于竇房結(jié)尾端靠近右上肺靜脈與右心房交界處;IRGP位于下腔靜脈與左、右心房交界處。(2)高頻刺激定位:應(yīng)用電生理刺激儀對ARGP和IRGP的解剖位置處脂

7、肪墊給予高頻電刺激(20Hz，0.1 ms，0.6～4.5V)時，出現(xiàn)迷走反應(yīng)即心率明顯減慢或出現(xiàn)房室傳導(dǎo)明顯延長即為GP所在部位。定位后，對24條犬的ARGP和IRGP進行射頻消融，消融成功后，即刻再次測定SAN和AVN的上述電生理指標(biāo)。24條犬分隨機3個組，分別于消融1、6和12個月后，重復(fù)檢測以上電生理指標(biāo)。
　　數(shù)據(jù)分析:統(tǒng)計分析3組犬SAN和AVN的電生理指標(biāo)在GP消融前后的變化。急性期變化采用配對t檢驗對比所有實驗犬消

8、融前后的變化;遠(yuǎn)期變化采用單因素方差分析對3個組進行組內(nèi)比較。
　　結(jié)果：
　　最終22條犬完成研究:1月組8條，6月組8條，12月組6條。
　　1.SAN電生理功能的變化:在消融后即刻(n=22)，靜息心率增快（164±10vs170±9 bpm，P=0.029），各起搏周長下的SNRT、cSNRT縮短。消融1個月后，靜息心率和SNRT、cSNRT恢復(fù)正常。至消融6個月和12個月時，SAN的電生理指標(biāo)與消融前相比均無

9、統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.AVN電生理功能的變化:消融后即刻，AVN有效不應(yīng)期延長（108±10 vs125±13 ms，P=0.000），文氏AVB起搏周長（175±10 vs189±16 ms，P=0.001）和2∶1 AVB起搏周長（157±12 vs171±15 ms，P=0.004）均延長，房顫時心室率（279±28 vs265±30 bpm，P=0.11）和各起搏周長下的AH間期無顯著變化;消融1個月后，AVN有效不應(yīng)期恢

10、復(fù)正常，而房顫時心室率(242±27 bpm)降低(P=0.044)、短起搏周長（280ms:87±11 vs104±12 ms，P=0.029;250ms:94±12vs110±12 ms，P=0.035）下AH間期延長，文氏（180±11 vs200±13 ms，P=0.01）和2∶1（159±14 vs180±13 ms，P=0.015）傳導(dǎo)阻滯的起搏周長仍延長;至消融后6個月，AVN功能恢復(fù)至消融前水平。
　　結(jié)論：

11、>　　ARGP和IRGP消融后，SAN功能在短時間內(nèi)增強，表現(xiàn)為靜息心率增快，SNRT和cSNRT縮短，消融后1個月，SAN功能恢復(fù)至消融前水平;消融后1個月時，AVN傳導(dǎo)功能下降，GP消融6個月后，AVN功能恢復(fù)至消融前水平。ARGP和IRGP消融后消融可導(dǎo)致SAN和AVN電生理功能短時間的變化，但無長期影響，提示ARGP和IRGP消融具有良好的安全性。
　　第二部分 心房神經(jīng)節(jié)叢消融對犬竇房結(jié)與房室結(jié)結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)期影響
　　目

12、的：
　　目前針對GP消融導(dǎo)致的SAN、AVN和心肌組織去神經(jīng)支配后，其形態(tài)結(jié)構(gòu)及蛋白表達的變化尚不明確，尤其是遠(yuǎn)期的變化。本研究旨在觀察消融正常犬模型的心房ARGP和IRGP對SAN與AVN組織結(jié)構(gòu)及連接蛋白表達的遠(yuǎn)期變化，探討GP消融后連接蛋白表達與電生理功能變化之間的關(guān)系，從連接蛋白的角度揭示電生理功能變化的原因，并為GP消融的臨床安全應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　在消融組（實驗組）24條犬之外，另取8條犬

13、作為假手術(shù)組（對照組）。為消除電生理檢查過程帶來的影響，假手術(shù)組的SAN和AVN功能也要檢測，然后行開胸手術(shù)，但不行射頻消融。對于消融組的3個亞組，在相應(yīng)的時間點（消融后1個月、6個月、12個月）行電生理指標(biāo)再次檢測完畢后，立即開胸、取出心臟（假手術(shù)組的8條犬行電生理檢查之后直接開胸、取出心臟），剪取SAN和AVN組織標(biāo)本，行組織病理切片、HE染色，光鏡下觀察SAN和AVN形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。因SAN和AVN與其周圍組織緊密結(jié)合或混雜（只在顯

14、微鏡下才可辨認(rèn)其大體邊界），故無法應(yīng)用Western-blot進行蛋白定量分析，本研究應(yīng)用免疫組織熒光方法檢測SAN和AVN連接蛋白43(Cx43)和45(Cx45)的表達，應(yīng)用圖像分析儀分析Cx43和Cx45的平均光密度(mean optical density, MOD)代表其表達水平。數(shù)據(jù)分析:采用單因素方差分析對比假手術(shù)組與GP消融組消融后各時間點SAN和AVN Cx43和Cx45表達的差異。
　　結(jié)果：
　　1.S

15、AN和AVN形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化
　　(1) SAN: SAN結(jié)構(gòu)致密，中央?yún)^(qū)細(xì)胞聚集成團或呈束狀。4組SAN標(biāo)本均可見竇房結(jié)動脈。SAN內(nèi)可見脂肪組織侵入。與消融前相比，消融后1、6、12個月的SAN細(xì)胞數(shù)及排列方式均無明顯變化。
　　(2) AVN位于房間隔和室間隔之間，與中心纖維體相鄰，4組標(biāo)本的AVN與中心纖維體之間可見大量脂肪組織（冰凍切片過程中形成空洞）。消融前和消融后1、6、12個月的AVN形態(tài)結(jié)構(gòu)無顯著差異。

16、>　　2.SAN和AVN組織Cx43、Cx45表達的變化
　　(1)SAN:消融后1個月時，消融組SAN的Cx43(0.14±0.04 vs0.52±0.04，P=0.000)和Cx45（1.28±0.29 vs3.17±0.40，P=0.000）表達水平顯著低于假手術(shù)組;與假手術(shù)組相比，消融后6個月(Cx43:0.51±0.03，P=0.865; Cx45:2.87±1.42，P=0.179)和12個月（Cx43:0.48±0.

17、03，P=0.268; Cx45:3.08±0.20，P=0.933）時SAN組織Cx43和Cx45的表達水平無顯著變化。
　　(2)AVN:消融組AVN的Cx43（0.35±0.07 vs1.09±0.17，P=0.000）和Cx45（2.11±0.42 vs4.32±0.40，P=0.000）表達水平顯著低于假手術(shù)組;與假手術(shù)組相比，消融后6個月（Cx43:0.94±0.33，P=0.787; Cx45:4.43±0.62，P

18、=0.969）和12個月（Cx43:1.16±0.13，P=0.939; Cx45:4.29±0.45，P=0.999）時AVN組織Cx43和Cx45的表達水平無顯著變化。
　　結(jié)論：
　　ARGP和IRGP消融后消融后1個月，SAN和AVN組織的Cx43和Cx45表達水平下降，至消融后6個月時恢復(fù)正常。GP消融后的房室傳導(dǎo)功能障礙可能與AVNCx43和Cx45的表達下降相關(guān)。ARGP和IRGP消融對SAN和AVN的結(jié)構(gòu)沒有