水稻T-DNA插入突變庫(kù)構(gòu)建及短根突變體的篩選和分析.pdf

1、水稻(Oryza sativa.L)是世界上主要的糧食作物之一，在世界范圍內(nèi)廣泛種植。由于水稻的基因組相對(duì)于其它單子葉植物來(lái)說(shuō)比較小，所以已經(jīng)成為研究單子葉植物的模式生物。根作為植物的三大器官之一，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育起著非常重要的作用。而根的長(zhǎng)度是根發(fā)育水平的一個(gè)重要的指標(biāo)。為了揭示植物根伸長(zhǎng)的分子遺傳學(xué)機(jī)理，本研究1)首先通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，建立了大約由10萬(wàn)個(gè)突變體組成的水稻T-DNA插入突變體庫(kù)，通過(guò)對(duì)其中1000個(gè)突變體進(jìn)行

2、GUS組織化學(xué)染色和PCR分析發(fā)現(xiàn)，該突變庫(kù)的陽(yáng)性率在90﹪左右；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)插入拷貝數(shù)進(jìn)行估算，結(jié)果顯示T-DNA的平均插入拷貝數(shù)大約是1.6，TOS的平均插入拷貝數(shù)是3.0左右，比野生型中的TOS插入拷貝數(shù)多1。該突變庫(kù)為以后各種類(lèi)型突變體的篩選和分離有價(jià)值的基因奠定了基礎(chǔ)； 2)采用沙培方法對(duì)該水稻T-DNA插入突變體庫(kù)進(jìn)行了大規(guī)模的篩選，篩選出了白/黃化苗、小苗、雙苗、短根和窄葉型5種突變體； 3)研究IAA、N

3、AA對(duì)水稻苗期根、莖的伸長(zhǎng)和根數(shù)的影響，結(jié)果顯示在低濃度范圍內(nèi)(<0.1mg/L)，IAA和NAA對(duì)根的伸長(zhǎng)都有不同程度的促進(jìn)作用，對(duì)芽的生長(zhǎng)雖然也有促進(jìn)作用，但影響小于對(duì)根伸長(zhǎng)的影響。高濃度時(shí)(>10mg/L)，IAA和NAA對(duì)生根(根的數(shù)目)有明顯的抑制作用； 4)重點(diǎn)研究了短根突變體的表型及發(fā)育，并利用PCR-walking技術(shù)對(duì)200個(gè)短根突變體的T-DNA插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列進(jìn)行了擴(kuò)增和分析，大約得到100條不同的側(cè)翼序列。比對(duì)