抗c-Myc納米抗體的淘選、表達(dá)及應(yīng)用.pdf

1、細(xì)胞中，存在著一類基因或者是基因家族，其在通常情況下為抑制狀態(tài)或維持較低表達(dá)水平，當(dāng)其在某些因素作用下，基因表達(dá)失去控制，細(xì)胞的正常生物學(xué)性狀會(huì)發(fā)生各種改變,逐步轉(zhuǎn)化成為惡性細(xì)胞,最終導(dǎo)致細(xì)胞甚至機(jī)體癌變。這類基因我們通常稱之為原癌基因(Proto-oncogene)。
　　myc基因家族為原癌基因家族中的一類，主要分為c-myc、n-myc、l-myc三類基因。myc基因家族及其產(chǎn)物主要與調(diào)控細(xì)胞周期的DNA結(jié)合,控制細(xì)胞的增殖

2、以及誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。研究認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移同c-myc基因的激活有密切關(guān)系。
　　量子點(diǎn)（QDs）是由II-VI族或III-V族元素組成的半導(dǎo)體材料，屬于納米晶體，受激后能發(fā)射熒光，可用于生物學(xué)分析。量子點(diǎn)激發(fā)光譜寬，同時(shí)發(fā)射光譜窄并且左右對(duì)稱，可以通過改變粒子大小控制熒光發(fā)射波長。與傳統(tǒng)有機(jī)熒光染料相比，量子點(diǎn)具有很高的量子產(chǎn)率和抗光漂白能力，而且熒光壽命長，具有良好的生物相容性。因此，量子點(diǎn)熒光技術(shù)在生物學(xué)領(lǐng)域具有廣闊前景

3、。
　　本研究采用噬菌體展示技術(shù)，從羊駝免疫庫中淘選能與c-Myc結(jié)合的納米抗體，并將淘選獲得的抗c-Myc納米抗體在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，純化的重組抗c-Myc納米抗體經(jīng)量子點(diǎn)標(biāo)記后，初步用于檢測細(xì)胞內(nèi)c-Myc蛋白的表達(dá)情況，主要研究結(jié)果如下：
　　1、通過四輪固相淘選，從羊駝c-Myc蛋白免疫文庫中獲得了了11個(gè)能特異性結(jié)合c-Myc蛋白的克隆，分別為A13、A18、A25、A26、A31、A32、B34、C5、C24、

4、C42、C46，并對(duì)這些克隆的親和力大小進(jìn)行了分析比較。
　　2、選取親和力相對(duì)較高的克?。ˋ25和A26），分別將編碼基因克隆至表達(dá)載體pET-25b（+），在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中，使用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示，重組蛋白分子量約20kDa，與預(yù)期分子大小相符。
　　3、初步驗(yàn)證了利用量子點(diǎn)標(biāo)記重組納米抗體用于細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)檢測的方法。制備SP2/0細(xì)胞爬片，用量子點(diǎn)熒光標(biāo)記納米抗體，檢測c-Myc蛋白在細(xì)胞