C-myc單克隆抗體的制備及鑒定.pdf

1、原癌基因c-myc是myc家族的重要成員之一,是髓細(xì)胞性白血病病毒的癌基因v—myc的細(xì)胞同類物,定位于染色體8q24.12—8q24.13,其編碼產(chǎn)物c—myc蛋白的分子量為62kDa。c—myc基因的功能甚多,它既是一種可易位基因,又是一種受多種物質(zhì)調(diào)節(jié)、可使細(xì)胞無限增殖、獲永生化功能、促進(jìn)細(xì)胞分裂的可調(diào)節(jié)基因,在很多腫瘤中都高表達(dá)。在正常細(xì)胞中的c—myc原癌基因一旦被激活,轉(zhuǎn)為癌基因,活化轉(zhuǎn)錄和翻譯,c—myc mRNA和c—m

2、yc蛋白的表達(dá)便異常增高,使細(xì)胞脫離正常生長的調(diào)節(jié)限制而具有高度增生潛能,向惡性表型轉(zhuǎn)化,抑制細(xì)胞分化,促進(jìn)細(xì)胞惡變,最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。
　　 鑒于c—myc的過表達(dá)與腫瘤發(fā)生呈高度正相關(guān),c—myc抗血清可以應(yīng)用于腫瘤的診斷,本研究通過制備c—myc單克隆抗體,為腫瘤診斷試劑盒的研發(fā)提供基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù)。用原核表達(dá)及純化的c—myc蛋白抗原免疫3只健康雌性BALB／c小鼠,3次免疫后取小鼠脾細(xì)胞與SP2／0骨髓瘤細(xì)胞以10:1比

3、例進(jìn)行細(xì)胞融合,再經(jīng)HAT選擇培養(yǎng)基篩選、間接ELISA方法檢測、有限稀釋法克隆,最終獲得2株能夠穩(wěn)定分泌抗c-myc特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,并分別命名為SHH-1H11和SHH-2A9。抗體亞型鑒定表明,SHH—1H11、SHH-2A9分別為IgG1亞類和IgM。經(jīng)BCA Proteln Assay Reagent Kit檢測顯示,雜交瘤細(xì)胞SHH—1H11上清和腹水的抗體濃度分別為0.47mg／ml和2.51mg／ml,SH