bFGF與C-myc在急性白血病中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、近年的研究表明，與實(shí)體腫瘤一樣，血液腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與血管新生和信號(hào)傳導(dǎo)也有密切的關(guān)系。目前這一研究已逐漸成為眾多學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。在腫瘤形成過程中，異常的血管生成發(fā)揮著關(guān)鍵作用。腫瘤生長依賴于血管生成。腫瘤細(xì)胞具有誘導(dǎo)血管生成的潛能，這種潛能必需在生長因子的刺激下才能轉(zhuǎn)化為發(fā)揮作用的表型。 bFGF是最強(qiáng)的血管生長因子之一，是一種十分重要的正性調(diào)控因子。近年來，研究表明，白血病患者體液中bFGF水平亦較正常對(duì)照明顯升高，骨髓中有

2、明顯的血管新生現(xiàn)象。體內(nèi)體外的各種實(shí)驗(yàn)均證實(shí)了bFGF對(duì)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的促增值活性。人們發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞有bFGF和/或bFGFR的異常表達(dá)，bFGF可以通過自分泌或旁分泌直接刺激白血病細(xì)胞，通過加強(qiáng)酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路水平促進(jìn)細(xì)胞增殖。 C-myc蛋白是一個(gè)終末分化的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，在生長控制、分化發(fā)育和細(xì)胞凋亡中均有重要作用。需有第2個(gè)生長信號(hào)(關(guān)鍵性生長因子)刺激，通過酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子C-myc的表達(dá)，才能抑制細(xì)

3、胞凋亡，促使細(xì)胞進(jìn)入增生狀態(tài)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。 本研究實(shí)驗(yàn)組為急性非淋巴白血病(ANLL)初診患者58例，急性淋巴白血病(ALL)初診患者22例，對(duì)照組為ANLL完全緩解患者(CR)40例，ALL完全緩解患者(CR)4例，血小板減少性紫癜患者(ITP)20例。應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)bFGF和C-myc在細(xì)胞中的表達(dá)，目的在于研究血管新生和bFGF與C-myc信號(hào)傳導(dǎo)通路之間的內(nèi)在聯(lián)系?？梢愿羁痰恼J(rèn)識(shí)急性白血病，并為急性白血病的治

4、療提供新的靶點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)材料與方法: 1、實(shí)驗(yàn)材料 (1)藥品與試劑：MML-V(Promega公司)，RNA酶抑制劑，隨機(jī)引物，1)kq酶(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)，PBS液，dNTPs，5×逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)緩沖液，10×PCR緩沖液，特異引物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)，瓊脂糖。 (2)實(shí)驗(yàn)器械：低溫離心機(jī)，RT-PCR儀，電泳儀，紫外透射反射分析儀 2、實(shí)驗(yàn)方法 研究對(duì)象為

5、ANLL初診患者58例，ALL初診患者22例。對(duì)照組為ANLL(CR)40例，ALL(CR)4例，血小板減少性紫癜患者(ITP)20例。收集患者的骨髓液行分離出單個(gè)核細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA及cDNA的合成后，根據(jù)引物的反應(yīng)條件行PCR反應(yīng)。取15μl擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂凝膠電泳，觀察結(jié)果并拍照。根據(jù)資料的性質(zhì)選用x<'2>檢驗(yàn)和精確概率法，使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行處理。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、bFGF的表達(dá)

6、 bFGF在初診ANLL的表達(dá)較CR高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異；初診ALL的表達(dá)較CR高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。bFGF在初診ANLL的表達(dá)較ITP高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異；初診ALL的表達(dá)較ITP高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。 2、C-myc的表達(dá) C-myc在初診ANLL的表達(dá)較CR高，x<'2>檢驗(yàn)P值小

7、于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異；初診ALL的表達(dá)較CR高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。c-myc在初診ANLL的表達(dá)較ITP高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異；初診ALL的表達(dá)較ITP高，x<'2>檢驗(yàn)P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。 討論: 實(shí)體瘤中的血管新生現(xiàn)象已被人們普遍認(rèn)可。近年人們發(fā)現(xiàn)白血病中同樣有血管新生現(xiàn)象的存在。bFGF是成纖維細(xì)胞生長因子(FGFs)中的一員，是

8、最強(qiáng)的血管生長因子之一。Gruber等報(bào)道毛細(xì)胞性白血病(HCL)患者的血清和骨髓中檢測(cè)到高水平的bFGF，并且具有生物學(xué)活性。異常升高的bFGF可刺激纖溶酶原激活物的釋放，從而產(chǎn)生纖溶酶，，纖溶酶一方面可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，參于血管新生的過程。bFGF還可通過自分泌/旁分泌機(jī)制誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)VEGF，進(jìn)一步證實(shí)了bFGF與腫瘤血管新生的密切關(guān)系。本文用RT-PCR方法檢測(cè)bFGF在AML和ALL骨髓細(xì)胞的例數(shù)高于正常對(duì)照組(P<0

9、.05)，提示bFGF在急性白血病有較高的表達(dá)，與急性白血病的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。 C-myc基因表達(dá)失控在腫瘤發(fā)生中起關(guān)鍵作用。一些研究已經(jīng)證實(shí)白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞存在C-myc基因高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出C-myc在初診ALL和ANLL表達(dá)的例數(shù)高于正常對(duì)照組(P<0.05)與上述結(jié)論相符。許多研究證實(shí)，腫瘤的發(fā)生與生長因子信息傳遞通路中一些癌基因蛋白的參與有關(guān)。生長因子與其受體相結(jié)合，酪氨酸激酶活性增高，激活Ras-MAPK通路

10、，最終信息傳至核內(nèi)，激活核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子C-myc，屬于促生長的早期應(yīng)答蛋白。本實(shí)驗(yàn)在初診ALL和ANLL中檢測(cè)到bFGF和C-myc均升高，由此可推測(cè)可能bFGF通過酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子C-myc的表達(dá)，促進(jìn)白血病的發(fā)生。 對(duì)bFGF和C-myc的檢測(cè)使我們認(rèn)識(shí)到血管新生和信號(hào)傳導(dǎo)在白血病的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要意義。迄今為止白血病的預(yù)后很差，其治療手段仍以化療和骨髓移植為主，生存率低，而且影響病人的生存質(zhì)量。因