Galectin-3和肝衰竭預后相關性的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分進行論述：
　　第一部分 血清Galectin-3在肝衰竭患者中的水平和意義
　　目的:檢測肝衰竭(HF)患者血清Galectin-3的表達，探討血清Galectin-3水平是否與肝臟疾病損傷的嚴重程度和預后相關，以及Galectin-3對HF患者預后的預測作用。同時，探討Galectin-3和其他HF預后指標聯(lián)合對HF預后判斷的作用。
　　方法:收集于2014年1月至2014年12月在南京市第二

2、醫(yī)院肝病科住院的HF患者（肝衰竭組，n=76），高黃疸患者（高黃疸組，n=38）和慢性乙型肝炎輕中度患者（慢乙肝組，n=26），正常對照（正常組，n=25）來自于同時間段的本院健康體檢者。入院時檢測各組的血清Galectin-3水平，并比較各組Galectin-3的血清水平。將肝衰竭組按照隨訪結束時患者的預后情況分為生存組和死亡組，觀察肝衰竭生存組和死亡組患者治療前與治療后血清Galectin-3水平的變化。同時，將兩組患者的一般基礎資

3、料、生化指標、HF并發(fā)癥和血清Galectin-3水平進行t檢驗或Mann-Whitney U檢驗，篩選出有意義的變量進一步行多因素Logistic回歸分析。最后，將多因素Logistic回歸分析得出的有意義的變量建立HF預后模型，并確定該模型的最佳臨界值。
　　結果: ELISA法檢測血清Galectin-3結果顯示，肝衰竭組為11.093±5.245 ng/ml，高黃疸組為11.004±6.634 ng/ml，慢乙肝組為3.6

4、26±0.806 ng/ml，正常組為3.582±0.729 ng/ml。肝衰竭組明顯高于正常組和慢乙肝組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，肝衰竭組與高黃疸組無明顯差異(P＞0.05)。
　　肝衰竭生存組和死亡組患者TBIL（P=0.028）、ALB（P=0.018）、INR(P=0.011)、Na+(P=0.001)、Bun(P=0.032)、Cr(P=0.026)、AFP(P=0.027)、TG（P=0.033）、TSH(P

5、=0.001)、肝性腦病(P=0.008)、感染(P=0.001)、腹水（P=0.000）和血清Galectin-3(P=0.01)水平差異有統(tǒng)計學意義，經(jīng)多因素Logistic回歸分析得出血清TBIL(P=0.011，β=-2.084)、INR(P=0.036,β=-3.520)、TSH(P=0.011,β=1.633)、血清Galectin-3(P=0.011,β=0.43)和腹水(P=0.001，β=-7.223)與HF的預后有關

6、。建立了HF預后擬合回歸模型: P=1/(1+e-y)，y=0.386-2.084X1-3.52X3+1.633X9+3.323X10-7.223X13（其中P為HF患者的生存概率，X1、X3、X9、X10、X13分別代表血清TBIL、INR、TSH、血清Galectin-3和腹水），回歸模型ROC曲線下面積為0.724，模型對檢驗樣本的預測準確率為85％。
　　對肝衰竭組患者的血清Galectin-3水平進行動態(tài)觀察后發(fā)現(xiàn)，肝衰

7、竭生存組患者的血清Galectin-3治療后水平較治療前明顯升高(Z=-6.792，P=0.000)，而肝衰竭死亡組患者治療前后血清Galectin-3水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（Z=-0.665，P=0.506）。
　　結論:血清Galectin-3是HF患者預后的一種保護因素，可以作為HF預后的判斷指標之一，可聯(lián)合臨床其他指標對HF預后做出合理的判斷。
　　第二部分 Galectin-3對肝細胞增殖的影響及機制

8、r>　　目的:構建Galectin-3基因特異性干擾慢病毒載體和過表達載體，轉染正常人肝細胞株(human hepatocyte，HH)。觀察干擾慢病毒載體和過表達載體轉染HH后，Galectin-3蛋白的表達情況，同時觀察HH的增殖活性和Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白的表達水平。
　　方法:實驗共分為五組，以Galectin-3 shRNA干擾慢病毒轉染的HH為干擾組，同時設置干擾陰性對照組，以Galectin-3過

9、表達慢病毒轉染的HH為過表達組，同時設置過表達陰性對照組，以未作處理的對數(shù)生長期HH為空白組。慢病毒載體轉染HH后置于熒光倒置顯微鏡下觀察感染效率，Western-blotting檢測各組Galectin-3蛋白的水平。應用CCK-8試劑盒檢測細胞增殖活性，Western-blotting檢測軸蛋白(Axin)、總的β連環(huán)蛋白(β-catenin)、磷酸化的β連環(huán)蛋白(p-β-catenin)、總的糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、磷

10、酸化的糖原合成酶激酶-3(p-GSK-3β)等蛋白的表達水平。
　　結果:干擾慢病毒載體和過表達慢病毒載體轉染HH后，Western-blotting結果顯示，干擾組Galectin-3蛋白的表達水平較空白組和干擾陰性對照組明顯下降(P＜0.01)，過表達組Galectin-3蛋白的表達水平較空白組和過表達陰性對照組明顯上升（P＜0.01）。
　　干擾慢病毒和過表達慢病毒感染HH后，分別在24h、48h、72h檢測細胞的吸光

11、度值（OD值），CCK-8試劑盒檢測結果顯示干擾組的OD值較空白組和干擾陰性對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，干擾陰性對照組與空白組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);過表達組的OD值較空白組和過表達陰性對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，過表達陰性對照組與空白組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　用Quantity One軟件分別對p-GSK-3β、GSK-3β、p-β-catenin、β-catenin

12、、Axin和β-actin蛋白的電泳條帶進行灰度分析。結果顯示，干擾組Axin蛋白和GSK-3β、p-β-catenin蛋白水平較空白組和干擾陰性對照組沒有明顯差異(P＞0.05)，干擾組p-GSK-3β、β-catenin蛋白水平較空白組和干擾陰性對照組明顯下降(P＜0.001);過表達組Axin蛋白和GSK-3β、p-β-catenin蛋白水平較空白組和過表達陰性對照組沒有明顯差異(P＞0.05)，而過表達組p-GSK-3β、β-c