柚木再生體系構(gòu)建的初步研究.pdf

1、柚木（Tectona grandisL.f.）為重要的珍貴用材樹(shù)種，天然分布于亞洲南部和東南部地區(qū)，木材具材質(zhì)堅(jiān)韌、耐腐，抗蟲等特點(diǎn)，因此具有很高的利用價(jià)值，但是其生長(zhǎng)一直面臨著許多的問(wèn)題，如低溫凍害、病蟲害等，通過(guò)生物技術(shù)手段改良柚木的基因遺傳性狀（耐寒、抗病或抗蟲性狀）已經(jīng)變得十分迫切。在過(guò)去的20年的時(shí)間里，國(guó)外已經(jīng)開(kāi)始了有關(guān)改良柚木基因性狀的非傳統(tǒng)育種方面的研究，而我國(guó)在柚木此方面的研究相對(duì)較遲，只是近幾年才開(kāi)始起步。在現(xiàn)代生物

2、技術(shù)中，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是高效進(jìn)行植物性狀改良的應(yīng)用技術(shù)之一，而實(shí)施轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良植物性狀的前提是要構(gòu)建一套能夠使植株高效的進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化的再生體系。本論文對(duì)柚木71-14、71-5等無(wú)性系外植體材料進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、分化培養(yǎng)等方面的初步研究，以期在改良柚木基因性狀方面為建立高效、穩(wěn)定的柚木無(wú)性系再生體系奠定基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果為：
　　1．四個(gè)柚木無(wú)性系（71-14、71-5、7544和7559）、三種基本培養(yǎng)基（MS、1/2 M

3、S和WPM）和四種外植體（莖尖，帶節(jié)間的莖段，不帶節(jié)間莖段、葉片）對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)的結(jié)果表明相同外植體不同無(wú)性系間愈傷誘導(dǎo)能力均存在著差異，其中71-5和71-14號(hào)無(wú)性系最易誘導(dǎo)愈傷；三種基本培養(yǎng)基中以 MS培養(yǎng)基更適合愈傷組織生長(zhǎng)；四種外植體中以莖段（不帶節(jié)間）外植體更適合愈傷組織的生長(zhǎng)。
　　2.柚木愈傷組織生長(zhǎng)的最佳培養(yǎng)條件試驗(yàn)的結(jié)果表明暗培養(yǎng)28d后轉(zhuǎn)到光下培養(yǎng)的愈傷誘導(dǎo)率最高，濾紙橋液體培養(yǎng)方式有利于愈傷的誘導(dǎo)，愈傷

4、組織最適繼代時(shí)間為30～35d。
　　3．以不帶節(jié)間的莖段為外植體，對(duì)柚木71-5、71-14號(hào)無(wú)性系開(kāi)展了不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理的單因素和雙因素誘導(dǎo)試驗(yàn)，單因素誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果表明2,4-D均不能誘導(dǎo)兩個(gè)無(wú)性系產(chǎn)生愈傷，71-5號(hào)無(wú)性系在添加生長(zhǎng)素NAA的情況下能夠產(chǎn)生愈傷，而細(xì)胞分裂素6-BA不能誘導(dǎo)其莖段（不帶節(jié)間）外植體產(chǎn)生愈傷；相反，6-BA能誘導(dǎo)71-14號(hào)無(wú)性系莖段（不帶節(jié)間）外植體產(chǎn)生愈傷組織，而NAA對(duì)其幾乎不起作用。雙

5、因素誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果表明采用NAA與6-BA兩種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合處理，71-14號(hào)無(wú)性系會(huì)產(chǎn)生致密型和疏松易碎型兩種類型愈傷組織，它們最適濃度組合分別為0.5mg·L-1NAA+1mg·L-16-BA及2mg·L-1NAA+2mg·L-16-BA；而71-5號(hào)無(wú)性系則僅產(chǎn)生疏松型愈傷組織，其最適濃度組合為2mg·L-1NAA+2mg·L-16-BA。
　　4.開(kāi)展的愈傷組織繼代增殖和分化試驗(yàn)研究結(jié)果表明MS為愈傷繼代、分化的較適培養(yǎng)基。