PPARγ激動劑吡格列酮對β-catenin介導的膠質(zhì)瘤細胞生長、遷移、凋亡的影響及其機制研究.pdf

1、目的：
　　 觀察PPARγ激動劑吡格列酮(pioglitazone)對膠質(zhì)瘤細胞生長、遷移、凋亡等生物學行為的影響，初步探討PPARγ激動劑的抗膠質(zhì)瘤作用及其可能機制，為臨床治療膠質(zhì)瘤及抗腫瘤藥物的開發(fā)提供治療靶點和理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1．CCK-8法檢測不同濃度的吡格列酮處理不同作用時間后對膠質(zhì)瘤細胞增殖能力的影響；細胞劃痕試驗檢測吡格列酮對膠質(zhì)瘤細胞遷移、侵襲的作用，Westem Blot法檢測

2、遷移相關蛋白的表達；TUNEL法檢測吡格列酮對膠質(zhì)瘤細胞凋亡的作用。
　　 2．Western Blot法、細胞免疫熒光技術檢測吡格列酮處理后，膠質(zhì)瘤細胞中β-catenin、E-cadherin表達和定位的變化；構(gòu)建β-catenin RNA干擾質(zhì)粒，采用CCK-8、細胞劃痕、TUNEL等方法，觀察轉(zhuǎn)染β-catenin siRNA后，膠質(zhì)瘤細胞增殖、遷移、凋亡等生物學行為的改變。
　　 3．PPARγ抑制劑GW966

3、2預處理細胞后再加入吡格列酮，CCK-8法檢測細胞增殖能力，Western Blot法檢測PPARy、p-catenin及其靶基因cyclin D1和c-myc的蛋白表達，了解吡格列酮對膠質(zhì)瘤細胞的抗腫瘤作用與PPARγ的關系。
　　 結(jié)果：
　　 1．CCK-8法結(jié)果顯示吡格列酮對膠質(zhì)瘤細胞生長有抑制作用，其抑制作用呈時間和劑量依賴性增強；細胞劃痕試驗發(fā)現(xiàn)吡格列酮抑制膠質(zhì)瘤細胞從劃痕邊緣向外生長，Westem Blot

4、法結(jié)果表明吡格列酮可以抑制MMP-2蛋白表達；TUNEL法提示吡格列酮促進膠質(zhì)瘤細胞凋亡，并且Western Blot法檢測發(fā)現(xiàn)細胞中凋亡誘導蛋白Bad、Bax表達顯著增加。
　　 2．Western Blot法結(jié)果顯示吡格列酮抑制膠質(zhì)瘤細胞中β-catenin蛋白表達，E-cadherin蛋白變化不明顯；細胞免疫熒光顯示細胞膜和細胞質(zhì)中β-catenin蛋白表達均下降，但其亞細胞定位未改變；轉(zhuǎn)染β-catenin siRNA后

5、，細胞中β-catenin表達特異性下降，細胞增殖活性減弱，遷移能力受抑制，MMP-2蛋白表達減少，TUNEL陽性凋亡細胞增多，Bad、Bax蛋白表達上調(diào)。
　　 3．GW9662預處理抑制PPARγ活性后，吡格列酮對β-catenin及其靶基因cyclinD1和c-myc的抑制作用部分受阻遏，同時抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖的作用減弱。
　　 結(jié)論：
　　 1．PPARγ激動劑吡格列酮能抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖和遷移，促進細胞