格列本脲對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤增殖生長的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的四大疾病（心臟病、腫瘤、腦血管病、阿爾茨海默病）之一，由細(xì)胞異常分化、增殖形成，化療作為治療腫瘤的主要手段，常常引起眾多副反應(yīng)，如：免疫功能極其低下、骨髓功能受到抑制等，并且在化療過程中，患者還出現(xiàn)對(duì)藥物的耐藥性，這更增加了醫(yī)療上治療的難度。星形膠質(zhì)瘤是腫瘤中常見類型，按照其病理學(xué)特點(diǎn)，世界衛(wèi)生組織將其分為四個(gè)病理級(jí)別，其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是Ⅳ級(jí)，屬于高惡性膠質(zhì)瘤，侵襲性較強(qiáng)，發(fā)病率極高，且術(shù)后容易

2、復(fù)發(fā)，致死率高，目前臨床治療效果不盡如意。因此，研究膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制并探尋新的治療手段迫在眉睫。
　　方法：
　　本課題使用藥物格列本脲作用膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251和U87,初步探索其對(duì)U251和U87的影響及機(jī)制研究。應(yīng)用CCK8、劃痕法、Transwell遷移與侵襲、Hocheset染色、流式細(xì)胞檢測(cè)、pH探針、蛋白免疫印跡（Western Blot）等多種分子生物學(xué)和電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)格列本脲對(duì)膠質(zhì)瘤U251和U87細(xì)胞

3、增殖生長的影響及機(jī)制。體外培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤U251和U87細(xì)胞，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。利用不同濃度的格列本脲作用于體外培養(yǎng)的U251和U87細(xì)胞，共培養(yǎng)48 h，以未加入格列本脲的細(xì)胞組別為對(duì)照組，CCK8測(cè)定細(xì)胞的增殖能力。劃痕法及Transwell觀察細(xì)胞遷移和侵襲。Hocheset染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。pH探針觀察細(xì)胞內(nèi)酸堿度改變。Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中Kir4.1和MCT1的表達(dá)水平
　　結(jié)果：

4、>　　CCK8顯示在一定濃度范圍內(nèi)，格列本脲可抑制細(xì)胞增殖(P＜0.05)，并呈濃度依賴性(P＜0.05)；劃痕法顯示格列本脲抑制細(xì)胞遷移(P＜0.05)，Transwell法顯示實(shí)驗(yàn)組遷移與侵襲細(xì)胞數(shù)量明顯減少(P＜0.05)，且隨著藥物濃度增高細(xì)胞數(shù)量逐漸減少(P＜0.05)；Hochest法及流式檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)明顯凋亡特征，且隨著格列本脲濃度的升高，凋亡現(xiàn)象越明顯(P＜0.05)；熒光探針顯示隨著藥物濃度的增加，熒光強(qiáng)度逐漸減