PPARγ激動劑吡格列酮對心肌細胞缺氧復氧損傷保護及機制的實驗研究.pdf

1、再灌注是缺血性心臟病的主要治療方法，而伴隨的缺血再灌注(ischemic/reperfusion，I/R)損傷成為影響療效的一個重要因素。由于缺血預適應(yīng)(Ischemic preconditioning，IPC)可以減輕心肌損傷[1]，因此IPC也成為了減輕再灌注損傷的重要手段之一。近年來實驗證實，一些藥物具有減輕心肌I/R損傷的作用，被視為“藥物預適應(yīng)”(pharmacological preconditioning，PPC)。先前研

2、究表明，各種預適應(yīng)誘導腺苷、緩激肽等內(nèi)源性物質(zhì)釋放，并通過蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(external-signalregulated kinase，ERK)及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide Kinase-3，PI3K)等途徑作用于線粒體敏感性鉀通道(mitochondrial ATP-sensitive K+channels，mitoKATP channels)而

3、發(fā)揮保護作用。另有研究表明，過氧化物酶體增殖物激活型受體Y(peroxisome proliferator activated receptors，PPARγ)配體可以減輕缺血再灌注損傷，我們先前的研究也表明，人工合成的PPARγ激動劑——噻唑烷二酮類藥物(Thiazolidinediones，TZDs)中的吡格列酮，可以通過開放mitoKATP通道發(fā)揮對抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用。本研究擬利用原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞，在既往研究

4、的基礎(chǔ)上進一步探討PPARγ激動劑——吡格列酮抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制。
　　 1.目的:
　　 1.1觀察吡格列酮對缺氧復氧后新生大鼠心肌細胞的保護作用及對蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)表達的影響。
　　 1.2觀察吡格列酮對缺氧復氧后的新生大鼠心肌細胞線粒體膜電位的影響及PKC抑制劑Chelerythrine對其的影響。
　　 2.方法:
　　 2.1

5、利用原代培養(yǎng)的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌細胞，分為溶媒對照組、H-r+溶媒對照組、H-r+2μM濃度吡格列酮組、H-r+2μM濃度吡格列酮+GW9662組，預處理24小時后建立缺氧復氧模型。收集心肌細胞，Hoechst33258染色法檢測心肌細胞凋亡：免疫印跡方法檢測PKC表達。
　　 2.2利用原代培養(yǎng)的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌細胞，分為溶媒對照組、H-r+溶媒對照組、H-r+0.

6、1μM濃度吡格列酮組、H-r+1μM濃度吡格列酮組、H-r+2μM濃度吡格列酮組、H-r+2μM濃度吡格列酮+ GW9662組、H-r+2μM濃度吡格列酮+Chelerythrine組，預處理24小時后建立缺氧復氧模型，模型建立后予線粒體膜電位檢測試劑JC-1處理，然后利用激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位(△ψm)。
　　 3.結(jié)果:
　　 3.1缺氧復氧后心肌細胞早期凋亡率升高(由溶媒對照組的0.20％±0.03％增加

7、至12.22±1.45％，p<0.05)；吡格列酮減少心肌細胞凋亡(8.32±0.89％)，而吡格列酮抗心肌細胞凋亡的作用又可以被GW9662阻斷(12.46±1.62％，p<0.05)；
　　 3.2與單純?nèi)毖鯊脱踅M相比，吡格列酮不增加PKC(1.033±0.026，p>0.05)表達：
　　 3.3與H-r+溶媒組相比，H-r+吡格列酮組可以抑制線粒體膜電位下降(p<0.05)，這種作用呈濃度依賴性，Cheleryt