PPARγ激動劑吡格列酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的機制研究.pdf

1、在工業(yè)化國家，缺血性心臟病是主要的死亡原因。目前針對冠心病的主要治療手段，包括溶栓、介入治療、冠狀動脈搭橋手術等，均是對缺血心肌實施再灌注，而再灌注也會造成心肌細胞的損傷。缺血再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)損傷成為阻礙缺血心肌從再灌注療法中獲得最佳療效的主要難題。既往研究表明，各種不同的PPARγ(peroxisomeproliferator-activated receptor-γ，過氧化物酶體增殖物激活受

2、體γ)激動劑(包括羅格列酮、曲格列酮和吡格列酮等)都可以減少心肌缺血再灌注損傷，發(fā)揮類似IPC(ischemia preconditioning，缺血預處理)的作用，并對其機制作了一定的研究。本研究利用原代培養(yǎng)的大鼠心肌細胞、急性分離的大鼠心肌細胞及成年大鼠，在既往研究的基礎上進一步探討PPARγ激動劑吡格列酮預處理抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的機制。 1．目的： 1.1．觀察KATP(ATP-sensitive potas

3、sium channel，ATP敏感性鉀通道)在吡格列酮抗大鼠心肌細胞缺氧復氧損傷中的作用； 1.2．觀察吡格列酮對急性分離大鼠心室肌細胞KATP電流的影響； 1.3．觀察在大鼠心肌缺血再灌注損傷時心肌ERK1/2、磷酸化ERK1/2、p38、磷酸化p38、TGFβ1、COX-2及HIF-1α表達的變化及吡格列酮對其影響。 2．方法： 2.1．利用原代培養(yǎng)的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌

4、細胞，分別予以0.1、1.0、2.0μM濃度吡格列酮預處理24h，同時分別予以特異性PPARγ受體阻斷劑GW9662、sarCKATP(sarcolemmal ATP-sensitive potassiumchannel，肌膜ATP敏感性鉀通道)阻斷劑HMR-1098和mitoKATP(mitochondria ATP-sensitive potassium channel，線粒體敏感性鉀通道)阻斷劑5-HD(5-Hydro-xydec

5、anoate，5-羥葵酸)處理后，建立缺氧復氧模型，Annexin V-FITC/PI雙染法及Hoechst33258染色法檢測心肌細胞凋亡：收集心肌細胞，利用免疫印跡方法，RT-PCR方法檢測兩種KATP亞單位Kir(inwardly rectifying K channel，內(nèi)向整流鉀通道)的表達。 2.2．急性分離成年SD大鼠心肌細胞，細胞缺氧后記錄KATP電流，觀察不同濃度吡格列酮灌流細胞后對電流的影響； 2.3

6、．成年SD大鼠30只，分組后分別予以5、10、20mg·kg-1·d-13種濃度吡格列酮灌胃×7d，灌胃后在體建立心肌缺血再灌注損傷模型：結扎冠狀動脈前降支30min，復灌30min，留取心肌組織，利用免疫印跡方法、RT-PCR方法檢測ERK1/2、磷酸化ERK1/2、p38、磷酸化p38、TGFβ1、COX-2及HIF-1α表達的變化及吡格列酮對其影響。 3．結果： 3.1．缺氧復氧后心肌細胞早期凋亡率升高(由空白組的

7、0.26±0.03％增加至12.22±1.45％，P＜0.05)，吡格列酮減少心肌細胞凋亡(各劑量組分別為10.09±0.67％、9.16±1.47％、8.32±0.89％)，僅2.0μM組與缺氧復氧組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。PPARγ受體阻斷劑GW9662阻斷2.0μM吡格列酮抗心肌細胞凋亡的作用(12.46±1.62％，P＜0.05)； 3.2．mitoKATP阻斷劑5-HD削弱吡格列酮抗心肌細胞凋亡的作用(凋亡率

8、10.00±0.50％，P＜0.05)，sarcKATP，阻斷劑HMR-1098無明顯影響(8.74±1.59％，P＞0.05)； 3.3．吡格列酮上調(diào)mitoKATP亞單位Kir6.1 mRNA及蛋白的表達，PPARγ，受體阻斷劑GW9662削弱這種上調(diào)作用；吡格列酮對sarcKATP亞單位Kir6.2 mRNA表達無明顯影響； 3.4．在急性分離成年SD大鼠心肌細胞，細胞缺氧后成功誘發(fā)出ATP敏感性鉀電流，不同濃度吡

9、格列酮灌流細胞后對電流無明顯影響； 3.5．缺血再灌注后，大鼠心肌ERK1/2、p38蛋白表達無明顯變化，磷酸化ERK1/2、磷酸化p38、TGFβ1、COX-2、HIF-1α表達上調(diào)；吡格列酮對ERK1/2表達無明顯影響，上調(diào)磷酸化ERK1/2表達；對p38表達無明顯影響，下調(diào)磷酸化p38的表達；上調(diào)TGFβ1mRNA、蛋白表達；上調(diào)COX-2 mRNA、蛋白表達；上調(diào)HIF-1αmRNA表達。 4．結論： 4