鈣調(diào)磷酸酶在缺血再灌注和腎上腺素能受體介導(dǎo)心肌凋亡中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分鈣調(diào)磷酸酶在缺血再灌注和腎上腺素能受體介導(dǎo)心肌凋亡中的作用研究 目的:研究鈣調(diào)磷酸酶(Calcineurin，CaN)在缺血再灌注和腎上腺素能受體介導(dǎo)心肌凋亡中的作用。 方法:體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，觀察不同劑量異丙基腎上腺素(Iso)和不同時(shí)間缺氧/復(fù)氧(H/R)下心肌細(xì)胞凋亡率的變化，并觀察Iso和H/R作用下CaN的表達(dá)，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率的變化，RT-PCR法檢測CaNmRNA的水平。 結(jié)果

2、:單獨(dú)Iso在大劑量才促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡率的升高，但小劑量Iso即可增加H/R所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率，CaNmRNA水平隨之增加，CaN抑制劑環(huán)孢菌素(CsA)可降低H/R和Iso所誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡率。 結(jié)論:β-腎上腺素能受體激動劑可促使H/R所誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，并且伴隨CaN表達(dá)的增加，CaN阻斷劑CsA可抑制二者共同作用所誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，說明CaN參與心肌凋亡，有促細(xì)胞凋亡的作用。 第二部分不同腎上腺素能受體阻斷劑對

3、鈣調(diào)磷酸酶表達(dá)的影響研究 目的:研究H/R和Iso作用下不同腎上腺素能受體阻斷劑對CaN表達(dá)及心肌細(xì)胞凋亡率的影響。 方法:體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，在H/R和Iso作用心肌前提下，給予不同選擇性的腎上腺素能受體阻斷劑，觀察CaN表達(dá)及細(xì)胞凋亡率的變化，用Westernblot法檢測CaN酶蛋白的表達(dá)及RT-PCR法檢測CaNmRNA的水平，流式細(xì)胞術(shù)和DNALadder法檢測心肌細(xì)胞凋亡的情況。 結(jié)果:β1受體阻斷

4、劑及α1、β受體阻斷劑可使CaN酶蛋白及mRNA表達(dá)降低，心肌細(xì)胞凋亡率減少，差異有顯著性意義(P＜0.05)，并且α1、β受體阻斷劑的效果更明顯(P＜0.01)，β2受體阻斷劑對CaN表達(dá)及細(xì)胞凋亡率影響不大，但α1受體阻斷劑可使二者增加(P＜0.05)。 結(jié)論:β1受體阻斷劑使H/R和Iso所誘導(dǎo)CaN表達(dá)下調(diào)，心肌細(xì)胞凋亡主要由β1受體介導(dǎo)，β1-受體拮抗劑可抑制二者共同作用所誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，CaN表達(dá)與心肌細(xì)胞凋亡率呈

5、正相關(guān)(r=0.953)。 第三部分鈣調(diào)磷酸酶在缺血再灌注和腎上腺素能受體介導(dǎo)心肌凋亡中作用機(jī)制的研究 目的:研究H/R和Iso作用下p38MAPK及Bad是否參與了鈣調(diào)磷酸酶(CaN)的促心肌細(xì)胞凋亡過程。 方法:體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，給予H/R和Iso處理，用Westernblot法檢測CaN、p38和p-p38的表達(dá)及RT-PCR法檢測CaNmRNA的水平，Westernblot結(jié)合免疫沉淀法檢測Bad和

6、p-Bad蛋白的表達(dá)，加用CaN抑制劑CsA，再觀察p38、p-p38、Bad和p-Bad蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:H/R和Iso處理心肌細(xì)胞后，CaNmRNA及CaN酶蛋白的表達(dá)均明顯增加，同時(shí)p-p38蛋白的表達(dá)也增加，p-Bad蛋白的表達(dá)卻減少，CaN抑制劑CsA加入后，p-p38酶蛋白的表達(dá)隨之減少，而p-Bad酶蛋白的表達(dá)增加，與干預(yù)前相比差異均有顯著性意義(P＜0.05)，Bad及P38蛋白的表達(dá)干預(yù)前后同正常對照組比較無