藍(lán)萼甲素對(duì)小鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：冠心病正在威脅著發(fā)展中國(guó)家和發(fā)達(dá)國(guó)家人民的身體健康。其中，急性心梗是冠心病致死的主要原因之一。心肌缺血再灌注被證實(shí)是最有效治療心梗的方法。不幸的是，再灌注過程會(huì)造成心肌的二次傷害，即心肌缺血再灌注損傷，并且損害再灌注對(duì)缺血心肌的治療效果。目前，對(duì)于心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制理解還不夠透徹，仍缺少有效治療心肌缺血再灌注損傷的方法。開發(fā)最佳的治療心肌缺血再灌注損傷的方法具有很大的前景。藍(lán)萼甲素（Glaucocalyxin A，GLA）是

2、一種從藍(lán)萼香茶菜分離出來的二萜類化合物，藍(lán)萼香茶菜作為民間藥，具有治療胃腸炎，抑制腫瘤，消炎等功效。關(guān)于藍(lán)萼甲素的藥理學(xué)研究主要集中在血小板和腫瘤細(xì)胞系等，發(fā)現(xiàn)它可以調(diào)節(jié)血小板活化、細(xì)胞死亡、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。我們實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)藍(lán)萼甲素通過GPVI相關(guān)信號(hào)通路抑制血小板的活化和血栓形成。最近有文獻(xiàn)報(bào)道，藍(lán)萼甲素能夠在氧化應(yīng)激的條件下保護(hù)心肌細(xì)胞。鑒于這些發(fā)現(xiàn)，我們?cè)噲D研究藍(lán)萼甲素對(duì)于小鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及相關(guān)保護(hù)機(jī)制。

3、　　方法：通過對(duì)野生型C57BL/6J小鼠的冠狀動(dòng)脈左前降支進(jìn)行結(jié)扎構(gòu)建心肌缺血再灌注模型，在再灌注的同時(shí)通過腹腔給予藍(lán)萼甲素。通過Evans blue和TTC雙染顯示心肌缺血再灌注后心臟梗死面積，并使用小動(dòng)物超聲儀評(píng)估心功能，以及通過免疫熒光的方法評(píng)估心臟組織中微血管血栓情況。我們同時(shí)檢測(cè)了心肌的再灌注損傷挽救激酶（Reperfusion Injury Salvage Kinase，RISK）信號(hào)通路中AKT和ERK1/2的磷酸化水平

4、變化。
　　結(jié)果：⑴通過缺血1小時(shí)，再灌注同時(shí)腹腔注射藍(lán)萼甲素，24小時(shí)后評(píng)估心梗面積的大小。結(jié)果顯示，給予藍(lán)萼甲素治療能夠明顯減小心梗面積(GLA組13.85±2.08％ vs對(duì)照組18.95%±0.97%，p＜0.05)。⑵小動(dòng)物超聲儀評(píng)估小鼠缺血1小時(shí)再灌注24小時(shí)候后的心功能，給予藍(lán)萼甲素治療能夠提高小鼠左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF，GLA組53.13±1.11% vs對(duì)照組49.99±1.25%，p<0.05）和左室短軸縮短率

5、（LVFS,GLA組28.34±0.71% vs對(duì)照組25.11±0.74%，p<0.05），改善心功能。⑶由于藍(lán)萼甲素已被證明通過影響血小板糖蛋白GPVI信號(hào)通路而抑制血小板的活化，我們通過免疫熒光的方法檢測(cè)了小鼠心肌缺血再灌注后心臟內(nèi)微血管血栓的情況。結(jié)果顯示，給予藍(lán)萼甲素治療，能夠減少再灌注過程的心肌內(nèi)微血管血栓形成。⑷為了研究藍(lán)萼甲素的心肌保護(hù)作用的分子機(jī)制，我們檢測(cè)了再灌注損傷拯救激酶信號(hào)通路中重要的蛋白 Akt和 ERK1/

6、2。結(jié)果顯示，給予藍(lán)萼甲素治療能夠提高Akt的磷酸化水平，而不改變ERK1/2磷酸化水平。
　　結(jié)論：在小鼠心肌缺血再灌注模型中，再灌注同時(shí)給予藍(lán)萼甲素可減小心肌梗死面積。這一保護(hù)作用可能與藍(lán)萼甲素在缺血再灌注過程中減小微血管血栓形成和加強(qiáng)抗凋亡信號(hào)通路的作用有關(guān)?？紤]到藍(lán)萼甲素具有低毒和低出血風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)點(diǎn)，其在治療心肌缺血再灌注損傷的研發(fā)可能有較好的前景。進(jìn)一步研究藍(lán)萼甲素的心肌保護(hù)作用機(jī)制，尤其是對(duì)細(xì)胞內(nèi)分子的調(diào)控以及藥代動(dòng)力學(xué)