橄欖苦苷對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：冠心病是世界范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡和殘疾的主要原因之一，其臨床表現(xiàn)為心肌缺血再灌注損傷（MIRI）。但是，到目前為止,其確切的發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。目前的研究主要集中在氧自由基形成、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞凋亡、氧及能量利用障礙等方面，尤其認(rèn)為氧化應(yīng)激損傷和細(xì)胞凋亡與MIRI的發(fā)生密切相關(guān)。橄欖苦苷是油橄欖葉中的主要活性成分之一，具有強(qiáng)大的抗氧化和清除氧自由基作用。早在2004年Manna等人首次報(bào)道橄欖苦苷對(duì)由缺血再灌注引起的離體心臟氧化性心

2、肌損傷具有一定的保護(hù)作用，但此后很少有學(xué)者進(jìn)行在體實(shí)驗(yàn)研究，也很少對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步研究。
　　目的：評(píng)價(jià)橄欖苦苷對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法：建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型和原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷模型，采用ELISA法檢測(cè)CK、SOD、LDH、CAT、MDA和GSH-PX的活性； TTC染色法觀察梗死心肌面積；HE染色觀察心肌損傷； TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡

3、；熒光探針DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ROS水平；JC-1染色法檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位；Western blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Cyt-C， Caspase-3， Caspase-9， Bcl-2/Bax，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)和蛋白激酶B(PKB/Akt)的磷酸化表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1）與大鼠缺血再灌注模型組相比，橄欖苦苷（100,200,400mg/kg）預(yù)處理明顯抑制大鼠缺血再灌注誘導(dǎo)的 CK、LDH和 MDA的

4、升高（P<0.01；P<0.05；P<0.05）和SOD、CAT和GSH-PX的降低（P<0.05；P<0.05；P<0.05）。模型組大鼠心肌梗死比率達(dá)18.9％，與空白對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。與模型組相比，橄欖苦苷預(yù)處理明顯降低梗死比率（P<0.05）和心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（P<0.05）。與模型組相比，橄欖苦苷（400mg/kg）明顯升高Bcl-2/Bax比值（P<0.01）；明顯增加p-ERK1/2和p-A

5、kt的表達(dá)（P<0.05，P<0.05）。2）與原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷模型組比較，橄欖苦苷（100,200,400μg/mL）呈濃度依賴地升高缺血再灌注誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞存活率（P<0.001），降低Hoechst33258熒光染色陽(yáng)性細(xì)胞比率（P<0.01）和心肌細(xì)胞凋亡率（P<0.001）。橄欖苦苷呈濃度依賴地降低CK、LDH和ROS水平（P<0.01，P<0.01，P<0.001），抑制MDA的過(guò)度釋放（P<0

6、.001），升高SOD、CAT和GSH-PX活性（P<0.05，P<0.05，P<0.05）。橄欖苦苷降低綠色/紅色熒光強(qiáng)度比值（P<0.001）。抑制Bax、Cyt-C、Caspase-3和Caspase-9的高表達(dá)（P<0.05， P<0.05，P<0.05，P<0.01），增強(qiáng)Bcl-2表達(dá)（P<0.05），升高Bcl-2/Bax比值（P<0.05）。橄欖苦苷（400μg/mL）誘導(dǎo)Akt和ERK磷酸化的高表達(dá)（P<0.05，P<

7、0.05）并升高p-Akt/t-Akt比值（P<0.01）和p-ERK/t-ERK比值（P<0.05）。加入PI3K/Akt的特異性抑制劑 LY294002則能夠抑制橄欖苦苷誘導(dǎo)的 Akt磷酸化高表達(dá)（P<0.05），并降低p-Akt/t-Akt比值，加入ERK的特異性抑制劑U0126則能夠抑制橄欖苦苷誘導(dǎo)的ERK磷酸化高表達(dá)（P<0.05），并降低p-ERK/t-ERK比值。
　　結(jié)論：橄欖苦苷可有效保護(hù)心肌缺血再灌注損傷，其作