鴨IFN-α真核表達(dá)質(zhì)粒對鴨瘟弱毒疫苗免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、本文將鴨α-干擾素真核表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-SDIFN-α)以每只1、3、6μg三個劑量用基因槍轟擊法和以每只50、100、200μg三個劑量用肌肉注射法分別免疫28日齡鴨，所有鴨15 d后接種鴨瘟(DP)弱毒疫苗，同時設(shè)空載體質(zhì)粒pcDNA3.1(+)對照組、DP弱毒對照組和空白對照組，接種后第3、7、14、21、28、35、49、63、84、105 d采抗凝血用淋巴細(xì)胞增殖試驗(MTT法)測定鴨外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化；第7、14、21

2、、28、35、49 d采抗凝血用流式細(xì)胞儀(FACS)測定CD<,3><'+>T淋巴細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)變化；第7、14、21、28、35、49、63、84、105、126、154、182 d采凝血用間接ELISA法和中和試驗檢測血清抗體水平；12 h、24 h、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、49 d、63 d、84 d采抗凝血用熒光實時定量PCR檢測血液中DPV-DNA含量。獲如下結(jié)果： 1.T淋巴細(xì)胞對C

3、onA的反應(yīng)能力(OD值)pcDNA-SDIFN-α以不同劑量、不同途徑免疫鴨后，再免疫DP弱毒，在第3 d時，T淋巴細(xì)胞對ConA的反應(yīng)能力就明顯高于弱毒對照組、空載體對照組和空白對照組，28 d達(dá)到峰值。其中實驗組極顯著(P≤0.01)或顯著(P≤0.05)高于弱毒對照組、空載體對照組和空白對照組；空載體對照組和弱毒對照組顯著(P≤0.05)高于空白對照組；空載體對照組略高于弱毒對照組但無顯著差異(P≥0.05)。 2.CD

4、<,3><'+>T淋巴細(xì)胞數(shù)量在第7 d時，鴨外周血CD<,3><'+>T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增多，實驗組鴨外周血CD<,3><'+>T淋巴細(xì)胞數(shù)量均極顯著(P≤0.01)或顯著(P≤0.05)高于弱毒對照組、空載體對照組和空白對照組；空載體對照組和弱毒對照組顯著(P≤0.05)或極顯著(P≤0.01)高于空白對照組；空載體對照組略高于弱毒對照組但無顯著差異(P≥0.05)。 3.外周血抗體IgG水平(OD值)在第7 d時，除空白對

5、照組外，所有組鴨血清抗體水平都迅速升高，在28 d時達(dá)到高峰。1、3、6、200μg免疫組鴨血清抗體IgG均顯著(P≤0.05)或極顯著(P≤0.01)高于弱毒對照組、空載體對照組和空白對照組；50和100μg免疫組稍高于弱毒對照組和空載體對照組，但無顯著差異(P≥0.05)；弱毒對照組和空載體對照組間鴨血清抗體水平無顯著差異(P≥0.05)，但極顯著(P≤0.01)或顯著(P<0.05)高于空白對照組。 4.外周血中和抗體效價

6、實驗組、弱毒對照組和空載體對照組鴨都產(chǎn)生了特異性鴨瘟抗體，其抗體中和效價在28 d時達(dá)到峰值。其中1、3、6、200μg免疫組抗體的中和效價高于50、100μg免疫組、弱毒對照組和空載體對照組的抗體中和效價。 5.外周血DPV-DNA的含量除空白對照組外，所有組鴨外周血液中DPV-DNA在12 h即可檢測到，其中12 h-49 d極顯著(P≤0.01)高于空白對照組，DPV-DNA拷貝數(shù)的數(shù)量級基本上為3.5-4.2。實驗組、弱

7、毒對照組和空載體對照組鴨外周血液中DPV-DNA含量無顯著差異(P≥0.05)。 綜上所述，pcDNA-SDIFN-α提前15 d免疫能使DP弱毒疫苗誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力增強，CD<,3><'+>T淋巴細(xì)胞數(shù)量的增多，血清抗體IgG水平和中和抗體效價的升高，是一種良好的增強DP弱毒疫苗細(xì)胞免疫和體液免疫的分子佐劑，pcDNA-SDIFN-α肌肉注射200μg/只、基因槍轟擊1μg/只的效果最佳。pcDNA-SDIFN-α經(jīng)不