鴨α-干擾素基因疫苗高密度發(fā)酵及免疫鴨抗鴨瘟強(qiáng)毒人工感染的研究.pdf

1、本文對(duì)鴨α-干擾素基因真核表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-SDIFN-α)的重組人腸桿菌大規(guī)模中試生產(chǎn)發(fā)酵培養(yǎng)條件、pcDNA-SDIFN-α免疫鴨抗0.5 LD<,50>鴨瘟強(qiáng)毒感染進(jìn)行系統(tǒng)研究，獲如下結(jié)果： 1.pcDNA-SDIFN-α大規(guī)模中試生產(chǎn)發(fā)酵培養(yǎng)條件 對(duì)pcDNA-SDIFN-α的重組大腸桿菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)條件(溫度、pH、溶氧濃度、補(bǔ)料速度、接種量、發(fā)酵時(shí)間和消泡劑添加量)優(yōu)化，篩選出了適合DH5α菌株生長的最佳

2、發(fā)酵條件為：溫度37℃，pH7.4，溶氧含量40％，接種量4％，補(bǔ)料速度80ml/h，發(fā)酵時(shí)間18h，消泡劑添加量0.02％，此條件下，pcDNA-SDIFN-α質(zhì)粒含量可達(dá)到357mg/L。 2.pcDNA-SDIFN-α免疫鴨抗0.5 LD<,50>鴨瘟強(qiáng)毒感染 將pcDNA-SDIFN-α分別按每1μg、3μg和6 μg三個(gè)劑量基因槍轟擊和50μg、100μg、200gg三個(gè)劑量肌肉注射免疫北京鴨，以PBS、空載體

3、質(zhì)粒pcDNA 3.1(+)和鴨瘟弱毒疫苗為對(duì)照，免疫15 d后分經(jīng)皮下、滴鼻、口服三個(gè)途徑人工感染0.5 LD<,50>鴨瘟強(qiáng)毒(含病毒DNA拷貝數(shù)為3.524x10<'4>)，統(tǒng)計(jì)發(fā)病死亡情況，并于攻毒后2 h、6 h、12 h、24 h、3d、6d、9d、14d、22d、26d、33d和40d采全血，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)鴨瘟病毒在鴨外周血中含量的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：①pcDlNA-SDIFN-α基因槍免疫組鴨外周血鴨瘟病毒

4、DNA含量比PBS和空載體對(duì)照組低，差異顯著(P<0.05)，在3d前都低于弱毒疫苗免疫組，差異不顯著(P>0.05)。三個(gè)劑量pcDNA-SDIFN-α免疫組之間外周血鴨瘟病毒DNA含量差異不顯著(P>0.05)，攻毒初期(2h)，6 μg免疫鴨外周血鴨瘟病毒DNA含量最低，3 μg次之，1 μg最高?；驑? μg免疫皮下攻毒組有3/9只鴨死亡，滴鼻攻毒組有3/9只鴨死亡；基因槍3μg免疫滴鼻攻毒組有3/9只鴨死亡；PBS和空載體免

5、疫組分別有13/27和10/27只死亡，基因槍6 μg免疫鴨以及鴨瘟弱毒疫苗免疫鴨獲得100％保護(hù)。病死鴨的脾臟、十二指腸、空腸、盲腸和直腸是鴨瘟病毒DNA含量較高的組織器官。pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫組鴨外周血鴨瘟病毒DNA含量比PBS和空載體對(duì)照組低，差異顯著(P<0.05)，在24h前都低于弱毒疫苗免疫組，差異不顯著(P>0.05)，攻毒初期(2h)，200 μg免疫鴨外周血鴨瘟病毒DNA含量最低，100 μg次之，5