mTORC1活化上調(diào)LDHB表達(dá)在肝癌發(fā)生中的作用及機(jī)理研究.pdf

1、背景：在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中,信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常激活非常常見。RTKs-PI3K-AKT-mTORC1信號(hào)傳遞通路控制細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、存活和分化中起著重要作用。其中哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)是一種受體酪氨酸激酶效應(yīng)的主要下游信號(hào)途徑。mTORC1是細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子,受營(yíng)養(yǎng)及能量信號(hào)的控制且對(duì)雷帕霉素(rapamycin)敏感。近年來,不斷有研究表明哺乳動(dòng)物雷帕霉素蛋白復(fù)合物1(mTORC1)活化及其下游信號(hào)通路的激活

2、在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起到非常重要的作用。但mTORC1異?；罨瘜?dǎo)致腫瘤發(fā)生的具體機(jī)制至今仍不甚清楚。
　　近年來,有研究發(fā)現(xiàn)LDHB在肺癌和睪丸生殖細(xì)胞腫瘤中顯著上調(diào),提示LDHB很可能參與了這些腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在敲除TSC1/TSC2后,細(xì)胞中LDHB表達(dá)明顯升高,并且在TSC1/2-mTORC1通路活化導(dǎo)致的腫瘤發(fā)生中 LDHB起重要的作用;并且mTORC1活化是可能通過激活STAT3來上調(diào)LDHB的表達(dá)來實(shí)

3、現(xiàn)的。因此,LDHB作為下游基因在mTORC1信號(hào)通路調(diào)節(jié)下,對(duì)肝癌發(fā)生、發(fā)展等各項(xiàng)生物學(xué)行為的具體影響,以及在肝癌細(xì)胞中mTORC1活化上調(diào)LDHB的具體機(jī)制需進(jìn)一步研究。
　　目的：本研究主要探討LDHB作為下游基因在mTORC1信號(hào)通路調(diào)節(jié)下,對(duì)肝癌發(fā)生、發(fā)展等各項(xiàng)生物學(xué)行為的影響,并進(jìn)一步探索在肝癌細(xì)胞中,mTORC1活化上調(diào)LDHB表達(dá)的作用和具體機(jī)制。
　　方法：通過免疫組織化學(xué)染色和Western blot方法

4、檢測(cè)肝癌組織和癌旁組織中mTORC1和LDHB的表達(dá)及其相關(guān)性。利用mTOR特異性抑制劑rapamycin處理肝癌細(xì)胞系 HepG2和SK-HeP1;利用特異性siRNA在肝癌細(xì)胞系HepG2和SK-HeP1中敲低mTOR,mTORC1特有的亞單位Raptor;用RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)LDHB的表達(dá)情況。用STAT3的特異性抑制劑AG490處理了肝癌細(xì)胞系HepG2和SK-HeP1,Western blot檢測(cè)抑

5、制STAT3活性后能否顯著降低LDHB的蛋白表達(dá)水平。進(jìn)一步檢測(cè),轉(zhuǎn)染STAT3的特異性siRNA能否降低肝癌細(xì)胞系HepG2和SK-HeP1中LDHB的表達(dá)。MTT法測(cè)定過表達(dá)或敲低LDHB對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2和SK-HeP1的增殖的影響。
　　結(jié)果：在75例肝細(xì)胞癌標(biāo)本中p-S6和LDHB的陽性表達(dá)率分別為80％和74.70%,癌旁組織中p-S6和LDHB的陽性表達(dá)率分別為46.7%和40%,肝癌組織中p-S6和LDHB表達(dá)

6、明顯高于癌旁組織(P<0.05)。p-S6和LDHB的表達(dá)均與腫瘤的分化程度,門靜脈栓塞有關(guān)(P<0.05),與腫瘤直徑、性別和年齡無明顯關(guān)系。p-S6和LDHB的表達(dá)有顯著相關(guān)性(r=0.238,P<0.05).Western blot分析表明肝癌組織LDHB表達(dá)升高,并且LDHB的表達(dá)水平與肝癌組織中mTORC1的活性(以p-mTOR表達(dá)水平為依據(jù))有明顯相關(guān)性;使用RT-PCR和western blot檢測(cè)sk-hep1和hepG

7、2肝癌細(xì)胞中,rapamycin處理和siRNA敲低mTOR、Raptor抑制LDHB表達(dá),結(jié)果顯示，LDHB表達(dá)及其LDHB的mRNA的表達(dá)明顯降低;進(jìn)一步使用STAT3的抑制劑AG490和siRNA敲低sk-hep1和hepG2肝癌細(xì)胞株中的STAT3后,免疫印跡檢測(cè)結(jié)果顯示LDHB的表達(dá)明顯降低;MTT檢測(cè)結(jié)果顯示敲低LDHB,能顯著抑制sk-hep1和hepG2肝癌細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)LDHB在肝細(xì)胞癌組織中