Akt1在肝癌細胞中的表達、活化及核轉(zhuǎn)位研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文Akt1在肝癌細胞中的表達、活化及核轉(zhuǎn)位研究姓名：朱麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：李錦軍200704220Ahl在肝癌細塑主塑壹鎏：鋈絲星塑墮堡堅究中文摘要Aktl在肝癌細胞中的表達、活化及核轉(zhuǎn)位研究中文摘要Akt是細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵調(diào)控因子，其自身及相關(guān)信號通路的過度活化己被證實與多種惡性腫瘤的發(fā)生和進展密切相關(guān)。本研究重點關(guān)注Aktl在肝細胞癌細胞系中的表達與行為。采用RTPCR、westc

2、mblotting及免疫細胞化學(xué)方法對肝癌細胞系及永生化細胞系研究分析發(fā)現(xiàn)，Aktl在多數(shù)肝癌細胞系中表達和磷酸化水平較高，而且磷酸化Aktl主要定位于細胞核，而在永生化細胞系中Aktl磷酸化水平較低，且核富集現(xiàn)象不明顯。Westernblotting檢測血清饑餓和外源性生長因子刺激情況下肝癌細胞中Aktl的磷酸化狀態(tài)，證實外源性生長因子對肝癌細胞中Aktl的活化具有調(diào)節(jié)作用。為深入探討磷酸化Aktl在肝癌細胞中發(fā)生核轉(zhuǎn)位的機制，我們構(gòu)

3、建了GFP標(biāo)簽的野生型Aktl(Al(t1WTGFP)及其失活突變體AktlAAGFP兩種質(zhì)粒，運用漂白后熒光恢復(fù)(fluoresccnogrecoveryafterphotobleaching。FRAP)技術(shù)，實時觀察熒光蛋白在SMMC7721活細胞中的運動情況。研究發(fā)現(xiàn)兩種融合蛋白均分布在細胞核與細胞質(zhì)中，且血小板源性生長因子(plateletd謝vedgrowthfactorPDGF)能夠加速AktlWTGFP的入核運動，而對Ak