MiR-375在肝癌發(fā)生中的代謝調(diào)控作用的研究.pdf

1、目的：肝癌是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，在癌癥死因中高居第3位。但是肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制仍未闡明。關(guān)于癌癥的最新認(rèn)識(shí)表明腫瘤細(xì)胞代謝變化是腫瘤的第七大特征性改變。microRNA是一類在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)的小RNA分子。miR-375不僅調(diào)控機(jī)體糖代謝而且在肝癌組織中明顯低表達(dá)并發(fā)揮了重要的抑癌作用。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹荚谔剿鱩iR-375在肝癌發(fā)生發(fā)展過程的代謝調(diào)控作用。
　　方法：應(yīng)用四氯化碳構(gòu)建肝纖維化-肝硬化模型、二乙基亞硝

2、胺構(gòu)建（DEN）構(gòu)建原發(fā)性肝癌模型；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)模型組織蛋白表達(dá),Taqman-PCR技術(shù)檢測(cè)組織內(nèi)miR-375的表達(dá)。利用人工合成的miR-375前體RNA分子過表達(dá)miR-375，通過定量PCR和Western-Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LDHA、HK2、GLUT1、PFKFB3、PKM2、G6PC、G6PD、ALDOA、PDK1、ACLY等代謝相關(guān)酶mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了肝纖維化-肝硬化,膠原纖

3、維特異性染色（masson染色）見大量纖維組織與假小葉形成；成功構(gòu)建了大鼠肝癌模型，肝組織見多個(gè)大小不等灰白色結(jié)節(jié)、HE染色鏡檢見異性增生的結(jié)節(jié)灶肝細(xì)胞體積增大，成空泡狀，異型和分裂象、結(jié)節(jié)周圍可見包膜；免疫組織化學(xué)檢測(cè)HK2基因，結(jié)果顯示HK2在正常肝組織內(nèi)幾乎不表達(dá)，肝纖維化-肝硬化組織表達(dá)上調(diào)，癌結(jié)節(jié)HK2表達(dá)明顯高于周圍組織；miR-375在肝纖維化-肝硬化與肝癌模型組織內(nèi)的表達(dá)明顯低于在正常肝組織內(nèi)的表達(dá)。過表達(dá)miR-375