PPARδ與GATA家族相互作用影響P19CL6細(xì)胞分化的研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activated receptors，PPARs)是核受體超家族成員之一，有α、β/δ和γ三個(gè)亞型。研究表明PPARδ在動(dòng)脈粥樣硬化、細(xì)胞發(fā)育和心肌能量代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用，PPARδ(-/-)基因敲除小鼠，出現(xiàn)心臟脂代謝紊亂，誘發(fā)心臟脂毒性。GATA家族是具有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，目前已知有6個(gè)家族成員，因其識(shí)別序列（A/T）GA

2、TA(A/G)而得名，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和存活，對(duì)于維持機(jī)體的功能發(fā)揮著重要作用。我室已有的研究表明，PPARα與GATA6相互作用協(xié)同激活心肌能量代謝關(guān)鍵基因Glut4的表達(dá)，進(jìn)而影響心肌的能量代謝。在心肌細(xì)胞分化過(guò)程中心肌的能量代謝會(huì)發(fā)生變化，基于同一家族成員蛋白分子之間結(jié)構(gòu)和功能方面的相似性，我們推測(cè)PPARδ是否也可以和GATA家族中的GATA4、GATA6相互作用來(lái)影響細(xì)胞的分化？
　　研究方法:
　　(1)

3、誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)通過(guò)誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)觀察PPARδ、GATA4、GATA6單獨(dú)或者共轉(zhuǎn)染P19CL6細(xì)胞時(shí)，對(duì)細(xì)胞分化的影響。
　　(2) CO-IP（蛋白質(zhì)免疫共沉淀）實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PPARδ與GATA4、GATA6在細(xì)胞內(nèi)是否存在生理性的結(jié)合。
　　(3)通過(guò)transfection（瞬時(shí)轉(zhuǎn)染）來(lái)驗(yàn)證PPARδ與GATA4、GATA6的相互作用對(duì)心肌細(xì)胞標(biāo)志基因α-MHC啟動(dòng)子活性的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)誘導(dǎo)分化實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果表明PPARδ、GATA4、GATA6單獨(dú)作用時(shí)能明顯促進(jìn)P19CL6細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化，而P19CL6細(xì)胞共表達(dá)PPARδ和GATA4、PPARδ和GATA6時(shí)，對(duì)細(xì)胞分化的協(xié)同促進(jìn)作用并不明顯甚至抑制了P19CL6細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化。
　　(2)蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PPARδ與GATA4、GATA6在體內(nèi)存在生理性的相互結(jié)合。
　　(3)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PPARδ與GATA4、GATA6對(duì)心肌標(biāo)志基因