生物色譜及其在中藥活性成分篩選中的應(yīng)用研究.pdf

1、本論文主要包括兩部分，第一部分是以自制的接枝型硅膠為基質(zhì)，制備了疏水色譜固定相，考察了填料的色譜性能，并將其應(yīng)用于胰蛋白酶的分離純化，取得較滿意的結(jié)果。第二部分是采用羰基咪唑的方法制備了兩種生物色譜固定相，分別考察了這兩種填料的分離性能并將其應(yīng)用于中草藥中活性成分的篩選，取得了良好的結(jié)果。
　　 本論文分為了四個部分：
　　 1.以自制的甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯(GMA)接枝硅膠為基質(zhì)，采用新的化學改性方法制備了新型疏水相互作

2、用色譜固定相(HIC)，并用于生物大分子的分離。詳細考察了其疏水特征以及初始鹽濃度、pH值、流速、溫度等因素對蛋白在色譜柱上保留時間的影響；結(jié)果表明，該高效疏水作用色譜填料的分離性能優(yōu)良，基線分離六種標準蛋白，吸附容量高達36mg.g-1，詳細研究了該疏水柱的熱力學性能，熱力學數(shù)據(jù)可以真實地反映出蛋白質(zhì)在HIC中的保留由熵控制。最后將該填料應(yīng)用于粗胰蛋白酶的純化，純化后的胰蛋白酶經(jīng)SDS-PAGE電泳驗證其純度高達95％以上。
　

3、　 2.以硅膠為基質(zhì)，采用羰基咪唑法合成了人血清白蛋白(HSA)固定相，考察了HSA生物色譜柱對小分子藥物的分離性能，以及pH值和溫度對小分子藥物保留的影響。并用該色譜模型對鐵棒錘中活性成分進行了篩選，利用MS對篩選出的四種活性成分進行結(jié)構(gòu)鑒定。從而建立了一種從中藥復(fù)雜體系中快速、高效的篩選活性成分的生物色譜方法。
　　 3.采用前沿洗脫的方式考察了辛克寧與固載化HSA的相互作用，發(fā)現(xiàn)隨著溫度的升高，二者的結(jié)合位點逐漸降低，可

4、能由于溫度的升高，辛克寧與固載化HSA之間的相互作用力(色散力、靜電力和氫鍵力等分子鍵作用力)減弱，致使活性位點的減少。期望以此為其它中藥活性成分與蛋白質(zhì)作用過程的研究提供一定的借鑒。
　　 4.用親和層析法純化得β-腎上腺素受體，并將其固定于硅膠表面制備了受體色譜固定相。用前沿色譜法測定了硫酸沙丁胺醇、重酒石酸去甲腎上腺素和鹽酸普萘洛爾與β2-AR的結(jié)合常數(shù)。結(jié)果表明，受體色譜固定相上的β2-AR與藥物的結(jié)合常數(shù)順序與文獻報道