細(xì)胞周期相關(guān)基因微陣列的構(gòu)建及其在中藥篩選中的應(yīng)用.pdf

1、原發(fā)性肝癌(Hepatocarcinoma)是一種常見(jiàn)的惡性程度極高的腫瘤,在中國(guó)居于腫瘤死亡率第二位,為當(dāng)前需要重點(diǎn)研究的疾病,因此篩選抗肝癌藥物具有重要的現(xiàn)實(shí)意義.傳統(tǒng)中藥用于治療癌癥已有悠久的歷史,中藥治療癌癥具有多位點(diǎn),副作用小等優(yōu)點(diǎn),但同時(shí)中藥存在藥效機(jī)制不明確和藥方復(fù)雜等缺點(diǎn),為中藥抗癌治療的研究帶來(lái)了一定的困難.近年來(lái)隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)肝癌發(fā)生的本質(zhì)的闡明,抗癌藥物的研究水平有明顯提高,中藥治療肝癌已顯示出較大的

2、優(yōu)勢(shì),并得到廣泛的應(yīng)用.已證明細(xì)胞周期調(diào)控異常與腫瘤發(fā)生密切相關(guān),該研究選擇細(xì)胞周期與損傷檢測(cè)相關(guān)的基因作為該文研究中藥作用機(jī)理的靶點(diǎn),制備了包含24個(gè)基因的cDNA微陣列,并檢測(cè)了微陣列的各項(xiàng)參數(shù),證明微陣列結(jié)果的可靠性.該研究選擇了1 種具有抗腫瘤潛力的中藥,以肝癌細(xì)胞系SMMC-7721細(xì)胞作為初篩模型,NIH-3T3成纖維細(xì)胞作為正常細(xì)胞檢測(cè)藥物的毒性,其中五種對(duì)SMMC-7721細(xì)胞抑制率高而對(duì)NIH-3T3細(xì)胞抑制率較低,分

3、別為烏藥(Radix Linderae)、紫草(Hebra Artemisiae Annuae)、黃芪(Radix Arnebiae)、青蒿(Radix Astragali)和遠(yuǎn)志(Radix Polygalne).同時(shí)該實(shí)驗(yàn)利用LOGIT法計(jì)算了每種藥物的半數(shù)致死計(jì)量(IC50);通過(guò)熒光染色技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)研究了五種中藥作用的細(xì)胞學(xué)機(jī)理;并采用該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的cDNA微陣列檢測(cè)了中藥作用細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞周期和損傷檢測(cè)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響.五

4、種中藥作用SMMC-7721后,細(xì)胞周期基因和損傷檢測(cè)點(diǎn)基因均有不同程度改變,部分基因表達(dá)上調(diào),部分基因下調(diào),這些和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的結(jié)果是相符合的.同時(shí)該研究還對(duì)五種中藥進(jìn)行了初步的組合研究,通過(guò)設(shè)計(jì)正交抑制率試驗(yàn)獲得了四種比較有效的組合,利用cDNA微陣列檢測(cè)藥物組合作用的分子學(xué)機(jī)理,發(fā)現(xiàn)不同組合作用后,基因表達(dá)有不同變化,但也有一定的規(guī)律,另外還研究發(fā)現(xiàn)黃芪是藥物組合中一種比較有效的成分,這些結(jié)果,為我們科學(xué)的研究中藥提供了一定的指