高效液相色譜-質譜法在中藥的應用研究

1、高效液相色譜 高效液相色譜-質譜法在中藥的應用研究 質譜法在中藥的應用研究摘要： 摘要：液質聯(lián)用技術將液相色譜(HPLC)的高分離效能與質譜(MS)的強大結構鑒定功能結合起來，逐漸成為中藥現(xiàn)代化研究的強有力手段。本文對我國科學工作者應用液質聯(lián)用技術在中藥化學成分分析、中藥質量控制、中藥體內代謝、藥代動力學、藥效學、中藥材指紋圖譜及在復方中成藥分析的方面進行的研究工作作一綜述。關鍵字： 關鍵字：HPLC-MS 質量控制 藥代動力學 藥效

2、學 指紋圖譜 中成藥分析HPLC是目前分離復雜體系最為有效的分析工具，由于其儀器自動化、普及化程度愈來愈高，已成為中藥分析最常用的儀器之一。但目前中藥分析中運用的HPLC儀器絕大多數(shù)與UV或DAD檢測器相聯(lián)接，對于單個色譜峰僅能提供保留時間及紫外圖譜等信號，而對未知成分所能提供的結構信息相當有限，對中藥等復雜體系的定性結果可能給出錯誤的結論[1]。MS是一種高靈敏度的檢測器，且不同化合物的特征性強，可用于部分解析未知化合物的結構。中草藥

3、是一個非常復雜的化學體系，其中含有大量的次生代謝產物，其結構復雜，性質相似，有的化合物還不穩(wěn)定。HPLC-MS將HPLC的高分離效能與MS的強大結構測定功能組合起來，為中藥化學成分的快速分析提供了一個重要的新技術。一、中藥化學成分研究 一、中藥化學成分研究中藥化學成分是其發(fā)揮藥效作用的物質基礎，它的深入研究是中藥現(xiàn)代化的關鍵和核心。以往中藥成分研究主要采用傳統(tǒng)提取分離方法，從復雜體系中分離提取單一化學物質，再通過光譜和質譜等分析技術進行

4、鑒定。 而且對環(huán)境極不友好。HPLC-MS在使化學成分達到有效分離的基礎上，提供豐富的化合物結構信息，在中藥化學成分分析中發(fā)揮了重要作用。中藥中某些常見的化學成分已經(jīng)有對照品，通過與對照品的色譜和質譜特征進行對照可以快速、準確地對化學成分進行鑒定。劉瑞等[2]采用HPLC-MS2鑒定大青葉水提液中的5種化學成分，通過與對照品的保留時間、色譜增益、紫外光譜圖和特征離子碎片進行比較，鑒定出大青葉水提液圖譜中的5個色譜峰分別為胞苷、尿苷、鳥苷

5、、黃嘌呤和次黃嘌呤。劉進懷等[3]建立了分析中藥三七的HPLC-UV-MS方法。通過與對照品比較，鑒定了14個成分；根據(jù)正負離子質譜數(shù)據(jù)和文獻，推斷出了41個化合物結構。其中，野三七皂苷-H、野三七皂苷-E、竹節(jié)參皂苷L5、丙二酰基人參皂苷-Rgl、以及三七皂苷-J、-A、-R1、-HPLC-MS可靈敏準確地測定中藥中含量低的活性或毒性成分。烏頭類生物堿即是烏頭中的有效成分又是有毒成分，王兆基等[9]用多反應監(jiān)測掃描方式測定樣本中烏頭堿

6、、次烏頭堿、中烏頭堿含量，方法適于樣品中含有微量烏頭類生物堿或其基質較為復雜的情況。Yue Song[10]建立了毛細管HPLC-ESI-MS法測定忍冬屬植物花蕾中所含的環(huán)烯醚萜苷類物質，方法具有良好的線性關系，最低檢測限為1.9ng/mL。應用該法首次成功的測定了植物中所含環(huán)烯醚萜苷的含量，為金銀花等藥材的質量控制奠定了基礎。三、中藥代謝與藥代動力學研究 三、中藥代謝與藥代動力學研究藥物代謝是指藥物在機體內的生物轉化過程。藥物進入體內

7、后，多數(shù)經(jīng)過代謝轉化失活或降低了活性。也有的藥物經(jīng)代謝轉化生成了藥理活性更強的代謝物。還有一些藥物經(jīng)代謝轉化會產生毒性中間體或代謝物。因此，了解中藥復雜體系的代謝過程和途徑，對于闡明中藥藥理作用的機理，了解中藥的毒副作用具有重要意義。中藥體內代謝和藥代動力學研究的挑戰(zhàn)在于缺乏對進入體內的所有微量組分和微量的代謝產物的足夠靈敏的分析方法，而HPLC-MS在一定程度上為其提供了契機。LC-MS在藥物代謝研究中除了可確定分子量外，還可以根據(jù)分

8、子特異性斷裂規(guī)律推導出重要部分結構甚至是完整的結構，其依據(jù)是由于多數(shù)藥物的代謝物保留了原形藥物分子的骨架結構。代謝物可能與母體藥物具有相似的裂解規(guī)律，即丟失一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征離子，因此利用LC-MS可以迅速找到可能的代謝產物，并鑒定出結構[11]。Peng Li等[12]使用大鼠肝微粒體與丹參酮ⅡA共同培養(yǎng)，用HPLC-MSn鑒別了大鼠肝代謝物中的丹參酮ⅡA及其代謝產物。采用電噴霧離子源，正離子掃描，通過與對照品對比

9、色譜保留時間和質譜碎片峰，成功地鑒別出丹參酮ⅡA的三種羥基代謝物丹參酮ⅡB、紫丹參甲素A和羥基丹參酯ⅡA，并推測出它們與丹參酮ⅡA和總丹參酮藥理活性相同。陳勇等[13]采用LC-ESI-IT-MSn研究了大鼠腹腔肌注氧化苦參堿后尿液中的代謝產物，在大鼠尿樣中發(fā)現(xiàn)6種I相氧化還原代謝產物，主要代謝物是苦參堿，未發(fā)現(xiàn)Ⅱ相代謝物。HPLC-MSn和HPLC-TOF-MS聯(lián)用。從多個角度提供信息，增加了定性的準確性。龐麗瓊等[14]建立大鼠血清