國產(chǎn)高聚物型色譜填料在高效液相色譜分離領(lǐng)域的應(yīng)用研究.pdf

1、聚苯乙烯型微米級(jí)微球不僅具有優(yōu)良的化學(xué)和機(jī)械穩(wěn)定性、易功能化、耐清洗和使用壽命長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)，而且具有較高的分離效率，適宜作為高效液相色譜(HPLC)的分離材料，應(yīng)用于藥物和生化產(chǎn)品等物質(zhì)的分離分析。國外已有學(xué)者對(duì)此開展了研究，國內(nèi)研究尚屬空白。
　　 本文用國產(chǎn)高聚物型色譜柱取代進(jìn)口色譜柱，研究其在有機(jī)酸發(fā)酵液、抗生素藥物和多肽分離分析中的應(yīng)用，為高聚物型填料在我國醫(yī)藥行業(yè)和生化領(lǐng)域下游分離純化過程中的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)，具有重要的理論意

2、義和實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。
　　 國產(chǎn)粒徑單分散的聚苯乙烯－二乙烯基苯(PS-DVB)微球裝填的麥科菲反相高效液相色譜柱(MKF-RP)，克服了早期高聚物基質(zhì)在有機(jī)相中溶脹，柱壓陡增的缺點(diǎn)，而與硅膠基質(zhì)的性能相似，在有機(jī)相中柱壓呈有限的、規(guī)律性的變化。通過高效液相色譜分離5種芳香衍生物(苯酚、4－硝基苯甲醛、硝基苯、苯甲酸乙酯和甲苯)，評(píng)價(jià)了該MKF-RP色譜柱的分離性能。通過優(yōu)化得到最優(yōu)的色譜分離條件：MKF-RP柱(250mm×4

3、.6mmid.)；流動(dòng)相A液：水(20％)，流動(dòng)相B液：乙腈(80％)；流速：0.6mL·min-1；溫度：45℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nmUV。在MKF-RP色譜柱上，苯酚進(jìn)樣量在0.2μg～40μg的范圍內(nèi)有著良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，重現(xiàn)性好，分析速度快且準(zhǔn)確。
　　 考查了以PS-DVB為基質(zhì)的麥科菲有機(jī)酸柱(MKF-YJS)在流速為0～3mL·min-1之間時(shí)，柱壓在0～250bar之間變化，柱壓與流速呈現(xiàn)很好的

4、線性關(guān)系，表明填料呈剛性且性狀穩(wěn)定。在MKF-YJS柱上，選擇了5種常見的有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品(甲酸、L-乳酸、乙酸、琥珀酸和丙酸)進(jìn)行色譜條件優(yōu)化，得到最優(yōu)分離條件：色譜柱：MKF-YJS(250mm×4.6mmi.d.，5μm)；流動(dòng)相：A：0.02mol·L-1NH4H2PO4(磷酸溶液調(diào)pH至2.5)，B=乙腈，B=3％；流速：1.0 mL·min-1；溫度：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。5種有機(jī)酸譜峰都可達(dá)到基線分離，對(duì)稱性在1.06

5、-1.28之間，分離柱效均大于32000 Plates·m-1。在上述優(yōu)化色譜條件下，MKF-YJS柱能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)琥珀酸發(fā)酵液中9種成分的快速檢測(cè)。結(jié)果表明，在分離分析有機(jī)酸的應(yīng)用中，MKF-YJS柱相比較于鍵合硅膠柱及進(jìn)口有機(jī)酸柱，具有更優(yōu)良的性能及性價(jià)比。在MKF-YJS柱上，琥珀酸進(jìn)樣量在1μg～240μg之間，線性良好(r=0.9999)。琥珀酸的RSD為0.628％。最低檢測(cè)限和最大上樣量分別為0.7μg和240μg。發(fā)酵液中琥

6、珀酸平均回收率為91.76％。
　　 參照國外藥典，將MKF-RP色譜柱應(yīng)用于土霉素藥物的分離，克服了中國藥典采用的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱所引起的色譜峰拖尾，柱效下降的缺點(diǎn)。通過優(yōu)化得到最優(yōu)色譜條件：色譜柱：MKF-RP(250mm×4.6mmi.d.)；流動(dòng)相：用200mL水，將45g2-甲基-2-丙醇移入1000mL的容量瓶中，再加入60mL、0.33mol-L-1的磷酸鹽緩沖液(pH7.5)，50mL、10g·L-1的

7、四丁基硫酸氫銨(預(yù)先用稀NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5)和10mL、0.4g·L-1的乙二胺四乙酸鈉(預(yù)先用稀NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5)，并用水稀釋至1000mL，過濾，脫氣；流速：1.0mL·min-1；溫度：60℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。在優(yōu)化的色譜條件下，土霉素供試品和土霉素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC分離的各項(xiàng)參數(shù)均符合國外藥典的要求，分離柱效大于3000。土霉素進(jìn)樣量在0.1μg～2μg之間，線性良好(r=0.9996)，柱性能穩(wěn)定。土霉

8、素峰面積的RSD為0.13％。
　　 采用高聚物型PS-DVB麥科菲反相高效液相色譜柱(MKF-RP-MH)分離胸腺素α1，這類疏水性基質(zhì)表面不含鍵合的烷基官能團(tuán)和殘留的硅羥基，不易產(chǎn)生不可逆的非特性吸附作用，克服了常用C18鍵合硅膠柱分離多肽的負(fù)面影響。優(yōu)化色譜條件為：流動(dòng)相A：0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH7.0或8.0)，流動(dòng)相B：乙腈，梯度洗脫條件0～20min，0％～10％B，20～40min，10％～30％