GnT-V和β1，6分支糖鏈對G-,2--M期腫瘤細(xì)胞遷移的影響.pdf

1、真核細(xì)胞表面普遍存在著糖基化修飾，主要包括連接在天冬酰胺上的N-糖鏈，連接在絲氨酸和蘇氨酸上的O-糖鏈，連接在絲氨酸上的糖胺聚糖(GAGs)和連在脂類物質(zhì)上的糖脂。糖鏈及其綴合物不僅參與生命活動的基本生理生化過程，而且在疾病的發(fā)生和發(fā)展中都發(fā)揮著重要作用。腫瘤細(xì)胞膜糖鏈可能發(fā)生重要變化，如過度或喪失表達某些原有結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生新的結(jié)構(gòu)等。這些腫瘤細(xì)胞表面糖基異?；c腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，其中比較常見是由于N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V(

2、GnT-V)活性增強而導(dǎo)致的復(fù)雜型N-糖鏈β1，6分支高表達。隨著基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展以及凝集素和質(zhì)譜技術(shù)在糖鏈檢測中的應(yīng)用，越來越多與腫瘤相關(guān)的糖鏈的結(jié)構(gòu)和功能被研究闡明，但是尚無文獻針對不同周期時相的腫瘤細(xì)胞膜糖鏈表達對腫瘤細(xì)胞運動的影響進行闡述。本論文的研究目的是分析細(xì)胞膜糖鏈的表達和不同周期時相腫瘤細(xì)胞遷移的關(guān)系，實驗主要包括三部分： 1、不同周期時相小鼠乳腺癌4T07細(xì)胞的制備 論文中采用細(xì)胞同步化技術(shù)將

3、4TO7細(xì)胞阻斷在特定的周期時相，為下面實驗奠定了基礎(chǔ)。 2、研究小鼠乳腺癌細(xì)胞4TO7在不同細(xì)胞周期時相的遷移及細(xì)胞膜糖鏈表達情況 Transwell小室法結(jié)果顯示各周期時相細(xì)胞都能夠發(fā)生遷移，其中G2/M期細(xì)胞遷移為首次發(fā)現(xiàn)。實驗結(jié)合BrdU摻入法和劃痕法驗證了S期和G2/M期細(xì)胞的遷移；同時我們使用了凝集素探針對同步化的G0/G0，G2/M期細(xì)胞和對數(shù)增長的各周期時相的4TO7細(xì)胞膜糖鏈表達進行分析，發(fā)現(xiàn)糖鏈結(jié)合

4、的凝集素?zé)晒鈴姸葻o顯著改變，其原因可能是糖鏈修飾的復(fù)雜性和微調(diào)性無法得到足夠的優(yōu)化放大。 3、GnT-V和β1，6分支對G2/M期4TO7細(xì)胞遷移能力的影響 β1，6分支是細(xì)胞膜復(fù)雜型N-糖鏈3、4天線中的一個分支結(jié)構(gòu)，本實驗室的前期實驗中已經(jīng)證明β1，6分支能夠促進4TO7細(xì)胞的遷移，但此細(xì)胞膜糖鏈?zhǔn)欠駥μ幱诓煌芷诘募?xì)胞的遷移能力具有相同的影響，尚無文獻報道。本文應(yīng)用秋水仙堿將細(xì)胞同步化于G2/M期，對GnT-V和β