Plk1通過(guò)與p53的相互作用參與G-,2--M期的轉(zhuǎn)換調(diào)控.pdf

1、在整個(gè)周期進(jìn)程中，細(xì)胞順利完成G2/M期的轉(zhuǎn)換是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖的一個(gè)關(guān)鍵步驟。由于細(xì)胞自身存在G2期DNA損傷檢驗(yàn)點(diǎn)的監(jiān)控機(jī)制，所以可以保證G2/M期轉(zhuǎn)換的順利實(shí)現(xiàn)。由于Pololike激酶(Plk1)和p53分別是通過(guò)正、負(fù)調(diào)控機(jī)制在G2/M轉(zhuǎn)換過(guò)程發(fā)揮重要的作用，并且有研究表明Plk1可以參與調(diào)節(jié)p53的活性。因此，本文致力研究Plk1是否可以通過(guò)調(diào)節(jié)p53蛋白參與G2/M期轉(zhuǎn)換過(guò)程的調(diào)控。 主要結(jié)果如下：1.將同步化在G2期

2、的細(xì)胞釋放培養(yǎng)，Plk1的激酶活性上升，說(shuō)明細(xì)胞由G2期順利地向M期過(guò)渡。采用低劑量UV照射的方法處理同步化在G2期的細(xì)胞，使Plk1的激酶活性受到抑制，并且伴隨著蛋白表達(dá)水平的降低，而p53的轉(zhuǎn)錄活性升高、蛋白大量積聚。 2.通過(guò)細(xì)胞免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在G2/M期Plk1與p53發(fā)生物理性的結(jié)合。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確證Plk1與p53的DNA結(jié)合區(qū)域發(fā)生直接結(jié)合作用。表明Plk1可能是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合p53的DNA結(jié)合區(qū)域來(lái)

3、抑制p53轉(zhuǎn)錄活性。在細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)Plk1也證明p53的轉(zhuǎn)錄活性受到抑制。 3.細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)Plk1可以抑制p53蛋白的磷酸化；共同過(guò)表達(dá)Plk1和Mdm2可以加劇Mdm2介導(dǎo)p53的泛素化降解；過(guò)表達(dá)Plk1還可以促使p53蛋白被轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞核。表明Plk1可以通過(guò)抑制p53的磷酸化、促進(jìn)p53蛋白降解以及抑制p53的入核作用來(lái)影響p53的蛋白穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性。 4.Plk1和hNRAGE分別作用于p53的不同區(qū)域，Pl

4、k1抑制p53的轉(zhuǎn)錄活性，而hNRAGE上調(diào)p53的轉(zhuǎn)錄活性，當(dāng)兩者共同作用后會(huì)相互抵消對(duì)p53的作用。hNRAGE對(duì)Plk1的激酶活性沒(méi)有影響。表明Plk1和hNRAGE可能作為兩個(gè)獨(dú)立的信號(hào)分子參與調(diào)節(jié)p53。 以上結(jié)果表明：在G2期DNA損傷檢驗(yàn)點(diǎn)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，Plk1可以通過(guò)與p53的DNA結(jié)合區(qū)域直接結(jié)合，抑制p53的磷酸化，加劇Mdm2介導(dǎo)的p53蛋白降解以及抑制p53入核的方式，抑制性調(diào)節(jié)p53的蛋白穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)