細(xì)胞角蛋白KRT18通過相互作用調(diào)控LRP16的亞細(xì)胞定位研究.pdf

1、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;解放軍總醫(yī)院碩士學(xué)位論文細(xì)胞角蛋白KRT18通過相互作用調(diào)控LRP16的亞細(xì)胞定位研究姓名：尹肖云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：孟元光;韓為東20090521軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩士學(xué)位論文結(jié)論：①角蛋白K R T l 8 與L R P l 6 存在體內(nèi)體外相互作用。②L R P l 6 和K R T l 8之間相互作用區(qū)域是K R T l 8 蛋白非螺旋化的球狀C 端結(jié)構(gòu)域。③L R P l 6 通過C端唯一的結(jié)構(gòu)域

2、與K R T l 8 相互作用。二、K R T l 8 對(duì)L R P l 6 亞細(xì)胞分布的影響目的：研究K R T l 8 對(duì)L R P l 6 亞細(xì)胞定位的影響。方法：①構(gòu)建真核表達(dá)載體L R P l 6 ．p E G F P 。②將L R P l 6 - p E G F P 質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，用熒光顯微鏡觀察L R P l 6的亞細(xì)胞定位。③L R P l 6 ．p E G F P 質(zhì)粒與攜帶K R T l 8 基因的F l a g

3、- p C D N A 3 - K R T l 8質(zhì)粒瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染，熒光顯微鏡觀察K R T l 8 對(duì)L R P l 6 的亞細(xì)胞定位的影響。④W e s t e r n ．B l o t 法進(jìn)一步驗(yàn)證K R T l 8 對(duì)內(nèi)源性L R P l 6 蛋白核漿分布的影響。結(jié)果-①成功構(gòu)建p E G F P —L R P l 6 融合載體。②熒光顯微鏡觀察L R P l 6 綠色熒光融合蛋白在N I H 3 T 3 細(xì)胞呈漿型分布為主，在M

4、 C F ．7 細(xì)胞呈核型分布為主。④L R P l 6 ．p E G F P 與K R T l 8 共同轉(zhuǎn)導(dǎo)N I H 3 T 3 和M C F - 7 細(xì)胞后熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)L R P l 6 明顯趨向于細(xì)胞漿分布。@ W e s t e r n b l o t 分析證實(shí)過表達(dá)K R T l 8 會(huì)介導(dǎo)內(nèi)源性L R P l 6 由胞核趨向胞漿分布。⑤小干擾s i R N A 技術(shù)證實(shí)在沉默K R T l 8的表達(dá)會(huì)抑制L R P

5、l 6 由胞核向胞漿穿梭。結(jié)論- ①L R P l 6 在上皮性腫瘤細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)物主要分布于細(xì)胞核，是作為核因子發(fā)揮作用的。②從細(xì)胞形態(tài)學(xué)上和蛋白水平再次證明K R T l 8 ／L R P l 6 在活細(xì)胞內(nèi)存在相互作用。③K R T l 8 可調(diào)控L R P l 6 的核漿穿梭，能夠?qū) R P l 6 亞細(xì)胞分布趨向細(xì)胞漿。④K R T l 8 可以將L R P l 6 扣留在細(xì)胞漿，是影響L R P l 6 亞細(xì)胞分布的關(guān)鍵因子