新型脂質(zhì)體結(jié)合超聲空化技術(shù)的腦膠質(zhì)瘤靶向遞送研究.pdf

1、研究目的：作為抗腫瘤藥物載體，脂質(zhì)體具有改變藥物在組織中的分布、提高穩(wěn)定性和降低藥物毒性等特點。本研究制備了一種新型脂質(zhì)體，并對其進(jìn)行了質(zhì)量評價，旨在為臨床提供一種新的高效低毒制劑。雖然血腦屏障的存在使腦組織少受甚至不受循環(huán)血液中有害物質(zhì)（如毒素、病毒等）的損害，對大腦形成有效保護(hù)的，但同時也阻礙了許多對病灶區(qū)有治療作用的藥物如抗癌藥、抗生素和肽類等的進(jìn)入。如何能使藥物有效透過血腦屏障并到達(dá)靶區(qū)成為了藥物發(fā)揮治療作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年研究

2、發(fā)現(xiàn)，超聲微泡空化技術(shù)能可逆、非侵襲性和局部地開放血腦屏障，為抗腫瘤藥物通過血腦屏障提供了新希望。本論文在課題組前期研究基礎(chǔ)上，利用創(chuàng)新制備的明膠-泊洛沙姆W/W型納米脂質(zhì)體結(jié)合超聲空化技術(shù)，探索攻克對于腦膠質(zhì)瘤的治療的瓶頸。
　　研究方法：
　　1、利用W/W型膠體結(jié)合二次凍干的制劑技術(shù)制備載藥脂質(zhì)體，通過外觀溶液觀察以及粒徑、Zata電位和包封率的測定，制備出符合注射要求的載藥脂質(zhì)體注射用粉針劑。
　　2、根據(jù)已有

3、自主知識產(chǎn)權(quán)的微泡制備方法，以產(chǎn)權(quán)要求的相同的處方與工藝條件制備脂質(zhì)微泡。以脂質(zhì)微泡的濃度、形態(tài)、粒徑及粒徑分布等作為考察指標(biāo)，制備出符合超聲空化條件的脂質(zhì)微泡。
　　3、采用腦立體定位法將10μl含1×106的C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種到SD大鼠的右側(cè)尾狀核，建立C6/SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型。觀察大鼠接種后的生存狀態(tài)，記錄體重變化和生存時間。于接種后第9、16、23和30天分別行MRI增強(qiáng)掃描評價此法的成模率，觀察接種后瘤體生長變化情況和

4、腫瘤特性等。為后續(xù)研究提供穩(wěn)定的模型來源。
　　4、在超聲頻率、聲強(qiáng)、微泡濃度和粒徑大小等參數(shù)一定下，通過EB示蹤法考察16天荷瘤鼠分別超聲輻照10S，30S和60S后靶點EB染色情況，結(jié)合HE染色觀察有無組織出血壞死等現(xiàn)象確定超聲輻照參數(shù)。并通過EB示蹤法和MRI實時顯影檢測技術(shù)考察確定的超聲參數(shù)開放不同時期血瘤屏障的情況。
　　5、通過免疫組化法和WB法測定瘤體邊緣緊密連接蛋白claudin-5和蛋白β1-integri

5、n于超聲微泡作用后0h，0.5h，1h，1.5h，3h，6h和12h的表達(dá)變化，考察蛋白β1-integrin是否可能參與血腦屏障開放的調(diào)節(jié)。
　　6、以C6/SD大鼠為腦膠質(zhì)瘤模型，以鹽酸阿霉素脂質(zhì)體(Lip-DOX)為治療藥物，通過單純尾靜脈注射藥物或單純微泡+超聲輻照大鼠或兩者結(jié)合進(jìn)行抗腫瘤治療。通過考察腫瘤體積抑制率、大鼠體重變化以及HE染色變化等指標(biāo)評價抗腫瘤效果;通過鹽酸阿霉素脂質(zhì)體的大鼠體內(nèi)分布情況，考察脂質(zhì)體的靶向

6、性。
　　研究結(jié)果：
　　1、本實驗制備的載藥脂質(zhì)體平均粒徑為183nm，粒徑對稱分布，分散均勻。分析可能是制備后經(jīng)過0.22um微孔濾膜過濾，加強(qiáng)了對脂質(zhì)體的整粒作用。本實驗制備的阿霉素脂質(zhì)體帶負(fù)電，其Zata電位為-16.6mV。
　　2、本實驗制備的脂質(zhì)微泡凍干粉呈白色疏松粉末狀，復(fù)溶性好，光鏡下，空白脂質(zhì)囊泡形狀圓整、粒徑較均勻，無聚集，平均粒徑為3.05μm。
　　3、建立的C6/SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型簡

7、單易行、穩(wěn)定可靠，成模率近100％。為后續(xù)研究腦膠質(zhì)瘤靶向治療方法提供了操作平臺。
　　4、本實驗在超聲頻率為1MHz、聲強(qiáng)為4W/cm2、輻照時間30S的參數(shù)下超聲聯(lián)合脂質(zhì)微泡可以可逆開放血腦屏障。并且在該超聲參數(shù)條件下，不同時期的腦瘤屏障開放程度基本一致。
　　5、一定程度上證明了蛋白β1-integrin表達(dá)的下調(diào)，可能會引起血腦屏障的通透性增加。
　　6、體內(nèi)實驗證明，新型脂質(zhì)體聯(lián)合超聲空化技術(shù)給藥系統(tǒng)可以非常

8、有效地將鹽酸阿霉素遞送入腦，并對腦膠質(zhì)瘤有顯著抑制作用。
　　結(jié)論：新型脂質(zhì)體聯(lián)合超聲空化技術(shù)給藥系統(tǒng)能夠增加藥物的腦內(nèi)和腫瘤轉(zhuǎn)運(yùn)，具有一定的腦內(nèi)和腫瘤遞藥特性。這種新型納米載體聯(lián)合超聲空化技術(shù)的遞藥方法有望成為一種新的腫瘤化療方法。本論文設(shè)計了一系列實驗，優(yōu)化了脂質(zhì)體的制備技術(shù)和各項超聲參數(shù)，通過體內(nèi)實驗驗證了這種給藥系統(tǒng)在腫瘤治療方面發(fā)揮的作用，提供了一種便捷的超聲介導(dǎo)抗腦腫瘤的治療方法。本文根據(jù)體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)結(jié)果，得到了一套安