Pten-Akt與線粒體信號通路在BPA誘導(dǎo)大鼠睪丸組織細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 BPA對大鼠睪丸支持細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究
　　目的：雙酚A（Bisphenol A, BPA）是一種在外環(huán)境中廣泛存在的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，可對雄性生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響，但其生殖毒性的機(jī)制研究還十分有限，本文旨在探討B(tài)PA暴露對大鼠睪丸支持細(xì)胞的影響及其機(jī)制的研究。
　　方法：采用不同終濃度的BPA（0、30、50及70mol/L）處理離體培養(yǎng)的支持細(xì)胞。采用MTT法測定細(xì)胞

2、活力；酶標(biāo)儀檢測支持細(xì)胞內(nèi)ROS的含量；采用SOD和MDA試劑盒檢測細(xì)胞總SOD活力及MDA含量；采用實時熒光定量PCR檢測支持細(xì)胞中Pten、Pdk1、Akt、cytochrome c、 Bax及procaspase-8的mRNA表達(dá)水平；采用Western blotting方法測定支持細(xì)胞中Pten、phospho-Akt、cytochrome c、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平以及凋亡相關(guān)蛋白procaspase-9和cleave

3、d caspase-3的表達(dá)水平；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測支持細(xì)胞凋亡率，采用 AO/EB及Hoechst33258檢測支持細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果：50mol/L的BPA致支持細(xì)胞活力明顯下降(P<0.05)；與對照組相比，BPA暴露還可以顯著增加細(xì)胞內(nèi)ROS的含量及支持細(xì)胞MDA的含量，顯著降低支持細(xì)胞 SOD活力(P<0.05)；不過，NAC的預(yù)處理則可顯著降低胞內(nèi)ROS的含量(P<0.05)。
　　BPA暴露可誘導(dǎo)

4、大鼠睪丸支持細(xì)胞Pten、Pdk1、Akt mRNA、cytochrome c、Bax以及procaspase-8mRNA表達(dá)水平顯著增高(P<0.05)。但NAC預(yù)處理可以拮抗BPA誘導(dǎo)的Bax、procaspase-8及cytochrome c mRNA水平的改變(P<0.05)。
　　BPA暴露還可導(dǎo)致支持細(xì)胞Pten、cytochrome c、Bax的蛋白水平增加，而Phospho-Akt及Bcl-2蛋白水平下降(P<0.

5、05)；凋亡相關(guān)蛋白procaspase-9表達(dá)水平明顯下降，而cleaved caspase-3蛋白表達(dá)水平則顯著增高(P<0.05)。NAC預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)cytochrome c、Bax表達(dá)水平，但對Bcl-2水平的改變不明顯。
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明BPA暴露可誘導(dǎo)支持細(xì)胞凋亡(P<0.05)。Hoechst及AO/EB雙染色結(jié)果也表明BPA可引起支持細(xì)胞核固縮，DNA斷裂等凋亡形態(tài)學(xué)改變。但是，抗氧化劑NAC可以明顯拮

6、抗BPA引起的細(xì)胞凋亡(P<0.05)。
　　結(jié)論：BPA暴露導(dǎo)致支持細(xì)胞的活力下降及細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高并誘導(dǎo)支持細(xì)胞凋亡，Pten/Akt信號通路在BPA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，而ROS可以通過介導(dǎo)線粒體信號通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　第二部分 BPA對青春前期SD大鼠睪丸細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究
　　目的：旨在體外研究基礎(chǔ)上探討B(tài)PA對青春前期SD大鼠睪丸細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究。
　　方法：對青春前期SD大

7、鼠按1ml/kg劑量，采用腹腔注射的方式進(jìn)行BPA染毒，分組如下：溶劑對照組、2 mg/kg b.wt、10 mg/kg b.wt及50 mg/kg b.wt。染毒方式為隔天染毒，共10天，染毒結(jié)束后第二天處死動物。用westernblotting方法檢測睪丸組織中Pten、Phospho-Akt、Bax、cytochrome c、FasL及凋亡相關(guān)蛋白procaspase-3及cleaved caspase-3蛋白水平；用TUNEL法

8、檢測睪丸組織凋亡狀況；HE染色觀察大鼠睪丸組織病理結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果：與對照組相比，BPA的作用可導(dǎo)致睪丸組織中Pten、Bax、cytochrome c、FasL的蛋白表達(dá)量增加，凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3蛋白表達(dá)水平升高，而procaspase-3蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)。不過，BPA暴露對Phospho-Akt蛋白表達(dá)水平無明顯影響；TUNEL檢測結(jié)果表明，BPA暴露可誘導(dǎo)睪丸生殖細(xì)胞凋亡