右美托咪定激活PI3K-Akt通路抑制體外循環(huán)大鼠肺組織細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：通過觀察右美托咪定（Dex）對(duì)體外循環(huán)（CPB）大鼠肺組織細(xì)胞凋亡的影響，探討其肺保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法：選擇350~500g的成年健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為5組（n=8）：缺血再灌注組（IR組）、右美托咪定組（D組）、二甲基亞砜組（DM組）、渥曼青霉素組）（W組）、渥曼青霉素+右美托咪定組（WD組）。5組分別在CPB并行循環(huán)10min后開胸，阻斷左肺門，建立左肺缺血再灌注損傷模型。D組于阻斷左肺門前10min給予

2、Dex3μg/kg-1，之后以1.5μg/kg-1/h-1持續(xù)泵注至CPB結(jié)束，IR組同時(shí)點(diǎn)給予等容量生理鹽水持續(xù)泵注至CPB結(jié)束，DM組同時(shí)點(diǎn)給予等容量等濃度的二甲基亞砜持續(xù)泵注至CPB結(jié)束，W組同時(shí)點(diǎn)給予15μg/kg-1的渥曼青霉素，之后以2.0μg/kg-1/min-1持續(xù)泵注至CPB結(jié)束，WD組同時(shí)點(diǎn)給予15μg/kg-1的渥曼青霉素，同時(shí)給予3μg/kg-1 Dex，之后渥曼青霉素劑量以2.0μg/kg-1/min-1，De

3、x以1.5μg/kg-1/h-1持續(xù)泵注至CPB結(jié)束時(shí)。各組分別于CPB前（T1）、開放左肺門時(shí)（T2）及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（T3）取動(dòng)脈血行血?dú)夥治觯?jì)算呼吸指數(shù)（RI）和氧合指數(shù)（OI）。在T3時(shí)點(diǎn)取左肺組織分成3部分，上部分經(jīng)4％多聚甲醛固定后行光鏡觀察肺組織損傷程度及病理評(píng)分；中部肺制備單細(xì)胞懸液經(jīng)流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞凋亡率；下部分用于檢測(cè)肺組織Akt、p-Akt、Caspase-3、Caspase-9的表達(dá)。并記錄各時(shí)點(diǎn)大鼠生命體征。

4、r>　　結(jié)果：
　?。?）各組大鼠心率（HR）與平均動(dòng)脈壓（MAP）的變化
　　各組不同時(shí)點(diǎn)比較：與T1時(shí)點(diǎn)比較，5組大鼠T2、T3時(shí)點(diǎn)HR、MAP明顯降低（P<0.05）；與T2時(shí)點(diǎn)比較，IR、DM、W、WD組T3時(shí)點(diǎn)HR明顯減慢（P<0.05）， D組T3時(shí)點(diǎn)HR明顯增快（P<0.05），IR、D、DM、WD組T3時(shí)點(diǎn)MAP明顯增高（P<0.05）， W組未見明顯改變（P>0.05）。各組同時(shí)點(diǎn)比較：T1時(shí)點(diǎn)，各組HR、

5、MAP均無(wú)明顯差異。T2時(shí)點(diǎn)，各組HR均無(wú)明顯差異（P>0.05），D組MAP明顯比IR、DM、W、WD組MAP增高（P<0.05）；T3時(shí)點(diǎn)，D組HR、MAP明顯高于IR、W、WD組（P<0.05）。IR、DM、W、WD組之間HR、MAP無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　?。?）各組大鼠氧合指數(shù)（OI）、呼吸指數(shù)（RI）的變化：
　　各組不同時(shí)點(diǎn)比較：與T1時(shí)點(diǎn)比較，5組大鼠T2、T3時(shí)點(diǎn)OI明顯降低，RI則明顯增高（P<0

6、.05）；與T2時(shí)點(diǎn)比較，5組大鼠T3時(shí)點(diǎn)OI明顯降低，RI則明顯增高（P<0.05）。各組間同時(shí)點(diǎn)比較：T3時(shí)點(diǎn)，D組OI明顯高于IR、DM、W、WD組，RI則相反，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　（3）各組大鼠肺組織光鏡結(jié)果及病理?yè)p傷評(píng)分
　　IR組肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡壁斷裂，肺泡腔充滿水腫液，可見紅細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；D組肺組織結(jié)構(gòu)較清晰，肺泡壁相對(duì)完整，見少量炎性滲出；DM組肺組織結(jié)構(gòu)稍清晰，可見少量肺泡壁斷

7、裂及炎性滲出；W組肺組織結(jié)構(gòu)明顯紊亂，肺泡壁斷裂嚴(yán)重，充滿水腫液，見大量紅細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺損傷程度明顯較D組重；WD組肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，可見紅細(xì)胞及炎性細(xì)胞滲出，肺損傷程度明顯較D組重。D組肺組織病理?yè)p傷評(píng)分比IR組、W組、WD組明顯降低（P<0.05），W組、WD組肺組織病理?yè)p傷評(píng)分明顯增高于IR組（P<0.05）；IR組與DM組間肺組織病理?yè)p傷評(píng)分無(wú)明顯差異；W組與WD組肺組織病理?yè)p傷評(píng)分未見明顯改變（P>0.05）。
　

8、?。?）各組大鼠肺組織細(xì)胞凋亡率的比較
　　D組肺組織細(xì)胞凋亡率明顯比IR、DM、W、WD組低（P<0.05）；DM組肺組織細(xì)胞凋亡率明顯低于W、WD組（P<0.05），IR組、W組及WD組之間比較肺組織細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）各組大鼠肺組織Akt、p-Akt表達(dá)的變化
　　D組大鼠肺組織Akt、p-Akt表達(dá)明顯高于IR、DM、 W及WD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；DM組肺組織Akt、p-A

9、kt表達(dá)比IR、W、WD組明顯增高（P<0.05）；IR、W及WD組間肺組織Akt、p-Akt表達(dá)無(wú)明顯變化。
　?。?）各組大鼠肺組織Caspase-3、Caspase-9表達(dá)的變化
　　D組大鼠肺組織caspase-3、caspase-9表達(dá)明顯低于IR、DM、W、WD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與IR組相比，DM組大鼠肺組織肺組織caspase-3、caspase-9表達(dá)明顯降低（P<0.05）；與W組相比，