內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活PI3K-AKT通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲.pdf

1、研究背景和目的：
　　多種應(yīng)激因素如缺血、乏氧、蛋白質(zhì)糖基化受阻以及鈣代謝障礙等均可導(dǎo)致蛋白質(zhì)折疊障礙，未折疊的蛋白質(zhì)堆積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，這種狀態(tài)被稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。由此引發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生一系列自我保護(hù)性反應(yīng)，即稱為ERS反應(yīng)（endoplasmic reticulum stressresponse,ERSS）。
　　腫瘤轉(zhuǎn)移為多因素、多步驟參與的復(fù)雜病理過程。很多研

2、究表明, PI3K/Akt通路與腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移關(guān)系密切。PI3K/Akt通路作為細(xì)胞內(nèi)重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，轉(zhuǎn)移瘤組織中 Akt磷酸化水平顯著高于原發(fā)腫瘤組織。PI3K/Akt通路激活可上調(diào)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9，引起細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解。作為實(shí)體瘤，胃癌瘤體內(nèi)存在缺血缺氧，可誘發(fā)ERS反應(yīng)。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)ERS可促進(jìn)胃癌轉(zhuǎn)移，但PI3K/Akt通路在ERS促進(jìn)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用尚不清楚。本研究擬選用兩種不同的

3、ERS誘導(dǎo)劑處理兩種不同胃癌細(xì)胞系，借以探討PI3K/Akt通路在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲中的作用。
　　方法：
　　1.貼壁培養(yǎng)胃癌細(xì)胞系BGC823和SGC7901，ERS誘導(dǎo)劑1μg/ml毒胡蘿卜素（tunicamycin，TG）或5μg/ml衣霉素（thapsigargin，TM）處理胃癌細(xì)胞0、2、12、24、36h后，收集細(xì)胞總蛋白，用Western blot技術(shù)檢測(cè)ERS標(biāo)志物GRP78及XBP1s的表

4、達(dá)及AKT的磷酸化水平的變化，以明確PI3K/Akt通路是否被激活。
　　2.貼壁培養(yǎng)胃癌細(xì)胞系BGC823和SGC7901并分組：未加藥對(duì)照組、ERS誘導(dǎo)劑組及ERS誘導(dǎo)劑加PI3K抑制劑組。收集細(xì)胞總蛋白，用Western blot技術(shù)檢測(cè)AKT的磷酸化水平的變化情況，以明確PI3K抑制劑對(duì)PI3K/Akt通路的阻斷效果。
　　3.貼壁培養(yǎng)胃癌細(xì)胞系BGC823和SGC7901并分組：未加藥對(duì)照組、ERS誘導(dǎo)劑組及ERS

5、誘導(dǎo)劑加PI3K抑制劑組。利用劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移及侵襲能力；利用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin、MMPs及VEGF的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可激活PI3K/Akt通路Western blot結(jié)果顯示：與0h組相比， ERS誘導(dǎo)劑TG或TM處理胃癌細(xì)胞系 BGC823和 SGC79012、12、24及36h后，GRP7

6、8及XBP1s的表達(dá)明顯上調(diào)，AKT的磷酸化水平明顯提高（P<0.05）。
　　2.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下PI3K抑制劑可阻斷PI3K/Akt通路Western blot結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，TG或TM處理胃癌細(xì)胞系BGC823和 SGC7901后， AKT的磷酸化水平明顯提高（P<0.05）；與ERS誘導(dǎo)劑組相比，ERS誘導(dǎo)劑與PI3K抑制劑聯(lián)合處理組AKT磷酸化水平明顯降低（P<0.05）。
　　3.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活 PI3K

7、/Akt通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲劃痕實(shí)驗(yàn)及 Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，TG或 TM處理胃癌細(xì)胞系BGC823和 SGC7901后，胃癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力均明顯提高；與ERS誘導(dǎo)劑組相比，ERS誘導(dǎo)劑與PI3K抑制劑聯(lián)合處理組胃癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力均明顯下降（P<0.05）；Western blot結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，N-cadherin、MMPs及VEGF蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，E-cadherin表達(dá)明顯